مطالعه اثر سلول های بنیادی مزانشیمی رت به عنوان لایه تغذیه کننده در جداسازی و کشت سلول های بنیادی جنینی موش

نسیم فرقانی، n. forghani science and research branch, islamic azad university, tehran, iranدانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران مهدی کدیور، m. kadivar dept. of biochemistry, pasteur institute of tehran tehran, iranانستیتوپاستور ایران، بخش بیوشیمی پریچهر یغمایی، p. yagmaei science and research branch, islamic azad university, tehran, iranدانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران سعیده کارگر، s. kargar dept. of biochemistry, pasteur institute of tehran tehran, iranانستیتوپاستور ایران، بخش بیوشیمی لیلی قاضی زاده، l. ghazizadeh science and research branch, islamic azad university, tehran, iranدانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران

Abstract

سابقه و هدف: سلول های بنیادی جنینی سلول های پرتوانی هستند که از توده سلولی داخلی بلاستوسیست مشتق می شوند. برای سلول های بنیادی جنینی اکثر گونه ها، لایه تغذیه کننده و سیتوکاین ها جزء الزامات کشت است. هدف اصلی از این مطالعه، استفاده از سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان رت به عنوان لایه تغذیه کننده در جداسازی و کشت سلو ل های بنیادی جنینی موش بود. مواد و روش ها: ابتدا سلول های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان رت استخراج شده و در محیط dmem و 10% سرم جنین گاوی کشت داده شدند. برای اطمینان از ماهیت مزانشیمی آن ها، سلول های کشت داده شده به مدت 21 روز در حضور مواد القا کننده تمایز به استخوان کشت شدند و در پایان این مدت تمایز سلولی با رنگ آمیزی اختصاصی بررسی شد. بلاستوسیست ها از موش های حامله نژاد balb/c به دست آمدند و بر روی لایه تغذیه کننده msc و محیط dmem و 10% fbs کشت داده شدند. 2 روز بعد از کشت، زونا پلوسیدا خارج شد، سلول های چسبیده به لایه تغذیه کننده تریپسینه شده و توده سلولی داخلی به خوشه های کوچک چند سلولی تبدیل شد. سپس توده های حاصل بر روی پلیت های 12 خانه ای پوشیده شده با msc ها قرار گرفت. هیچ گونه ماده رشد یا سایتوکاین به محیط اضافه نشد. 2-3 روز پس از پاساژ، کلونی هایی تشکیل شد که بر اساس مورفولوژی به کلونی های escs شباهت داشتند. مطابق روش فوق، کلونی های حاصل تا دو بار دیگر بر روی msc ها پاساژ داده شدند و نهایتاً ماهیت کلونی های رشد کرده حاصل از طریق بررسی های مورفولوژیک و نیز رنگ آمیزی با آلکالین فسفاتاز مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: در این مطالعه سلول های بنیادی مزانشیمی به راحتی با استفاده از محیط dmem کشت داده شدند. ماهیت مزانشیمی سلول های حاصل که از لحاظ مورفولوژی، فیبروبلاستی بودند با تمایز به توده های استخوانی و رنگ پذیری با آلیزلرین رد تایید شد. با استفاده از محیط dmem و به کارگیری سلول های مزانشیمی کشت شده به عنوان لایه تغذیه کننده سلول های بنیادی جنینی موش بدون استفاده از هرگونه سایتوکاین و محرک رشد کشت شدند. پس از انجام پاساژ سلولی، کلونی هایی تشکیل شد، که این کلونی ها تا دو پاساژ دیگر هم کشت شدند که هر بار بر میزان تشکیل آن ها افزوده می شد و در نهایت ماهیت بنیادی این کلونی ها با رنگ آمیزی آلکالین فسفاتاز اثبات شد. نتیجه گیری: نتایج حاصل از تحقیق نشان داد سلول های بنیادی مزانشیمی جدا شده از مغز استخوان رت توان تمایزی به رده های استخوانی را دارند و می توان از آن ها به عنوان لایه تغذیه کننده برای جداسازی و کشت و تشکیل کلونی های سلول های بنیادی جنینی استفاده کرد. این روش با حذف نیاز سایتوکاین ها و محرک های رشد، روشی ساده و کارا برای جداسازی و کشت کلونی های سلول های بنیادی جنینی می تواند باشد