ارزیابی روش الایزا با استفاده از آنتی ژن های دفعی – ترشحی توکسوپلاسما برای تشخیص توکسوپلاسموزیس در موش صحرایی
Abstract
خلاصهسابقه وهدف: با توجه به گزارش های قبلی، به نظر می رسد آنتی ژن های دفعی – ترشحی(e/sa) توکسوپلاسما گوندی نشانگرهای مناسبی برای تشخیص توکسوپلاسموزیس با روش های سرولوژی باشند. در مطالعات قبلی معمولاً مایع رویی کشت سلولی توکسوپلاسما یا محیط کشت rpmi-1640 که تاکی زوئیت های تک یاخته در آن انکوبه شده بودند، به عنوان ترکیب حاوی e/sa استفاده شده اند. این مطالعه به منظور ارزیابی روش الایزا با استفاده از مایع صفاق موش سفید کوچک آزمایشگاهی آلوده به توکسوپلاسما (یکی از ترکیبات حاوی آنتی ژن های دفعی – ترشحی توکسوپلاسما) به عنوان آنتی ژن، برای تشخیص توکسوپلاسموزیس در موش صحرایی صورت گرفت.مواد و روش ها: مایع صفاق موش سفید کوچک آزمایشگاهی که 3 روز قبل به طریق تزریق داخل صفاقی با تاکی زوئیت های توکسوپلاسما آلوده شده بود، کشیده شد و با دور ×g750 به مدت 15 دقیقه سانتریفوژ گردید سپس رسوب سولفات آمونیوم اشباع (30%) (ترکیب حاوی آنتی ژن های دفعی – ترشحی) از مایع رویی آن تهیه شد.40 سر موش صحرایی نر با سن 10-7 هفته و غیرآلوده به توکسوپلاسما) dye - testمنفی( انتخاب و به هر کدام 106×4 تاکی زوئیت توکسوپلاسما از طریق داخل صفاقی تزریق گردید. به منظور انتخاب نمونه سرم مناسب از مراحل سیر آلودگی، سرم روزهای 8، 15، 22 و 60 بعد از آلودگی موش های صحرایی تهیه شد در مرحله بعد نمونه های سرم روزهای فوق مربوط به10 سر از آن ها به روش dye-test و سرم روزهای 15 و 60 تمام حیوانات بعد از آلودگی نیز به عنوان نمونه های مناسب هم به روش dye-test و هم به روش الایزا با استفاده از ترکیب حاوی e/sa تهیه شده به طریق مورد نظر در این مطالعه، آزمایش شدند.یافته ها: با توجه به نتایج آزمایش سرم روزهای مختلف موش های صحرایی آلوده، سرم روز 15 و60 به عنوان نمونه های مناسب انتخاب شدند تحت شرایط مورد نظر در این بررسی، cut-off تست الایزا با 99% اطمینان برابر 33/0 تعیین گردید که میزان جذب نوری تمام نمونه سرم های روزهای 15 و 60 آلودگی و هم چنین دو مورد از سرم های منفی بالاتر از آن بدست آمد. ویژگی و حساسیت آزمون نیز به ترتیب 95% و 100% تعیین شد.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که روش الایزا تحت شرایط مورد نظر در این مطالعه و با استفاده از رسوب سولفات آمونیوم اشباع (30%) مایع صفاق موش سفید کوچک آزمایشگاهی آلوده به توکسوپلاسما، آزمون نسبتاً مناسبی برای تشخیص توکسوپلاسموزیس در مدل حیوانی مورد مطالعه می باشد.واژه های کلیدی: توکسوپلاسموزیس، الایزا، آنتی ژن های دفعی - ترشحی، توکسوپلاسما گوندی