همسانه سازی، بهینه سازی شرایط بیان، تخلیص و ارزیابی خواص ایمونولوژیک بخش هیدروفیلیک آنتی ژن core ویروس هپاتیت c، ابراز شده تحت پروموتر t۷-arabad در e.coli
Abstract
چکید ه سابقه و هدف آنتی ژن core ویروس هپاتیت c ، یک پروتئین چندکاره با ارزش های ویژه در اهداف تشخیصی و تحقیقات پاتوفیزیولوژیک می باشد. اکثر این خواص مربوط به بخش هیدروفیل (آمینو اسید: 122-2) این آنتی ژن بوده و دسترسی به روشی برای تولید مقادیر انبوه از این پروتئین در فرم خالص و طبیعی، از اهمیت به سزایی برخوردار است. به این جهت با هدف همسانه سازی(کلونینگ ژن)، ابراز پروتئین با بازدهی بالا، تخلیص در فرم طبیعی و ارزیابی خواص ایمونوژنیک این بخش از پروتئین core ویروس هپاتیت c در یک سیستم پروموتری t7 تحت القا آرابینوز، مطالعه حاضر صورت پذیرفت. مواد وروش ها در این مطالعه تجربی، از روش pcr برای جداسازی ژن و از حامل pivex2.3 جهت کلونینگ ژن با استفاده از روش های مهندسی ژنتیک استفاده شد. آنالیزهای پروتئین توسط sds-page ، وسترن بلات و الیزا بر روی سرم بیماران hcv مثبت انجام شد و تخلیص پروتئین به روش کروماتوگرافی جذبی بر روی نیکل (ni-nta) صورت پذیرفت. یافته ها ژن مربوط به بخش هیدروفیل hcv core با موفقیت و با ترادف صحیح، جداسازی و به طور مناسب در کاست بیانی کلون گردید. سیستم القا آرابینوز به طور مؤثر، پس از 3 ساعت، قابلیت تولید پروتئین نوترکیب با بازدهی mg/l 5/3 را داشته و پروتئین تولید شده به سهولت و دریک مرحله قابلیت تخلیص شدن تاحدود 80 درصد بر روی ستون جذبی ni-nta را دارا می باشد. پروتئین خواص آنتی ژنیک خود را در ساختمان طبیعی حفظ می نماید. نتیجه گیری در این مطالعه برای اولین بار نشان داده شده که سیستم القا آرابینوز به طور مؤثر، قابلیت کاربرد در تولید بخش هیدروفیل پروتئین core را دارد و پروتئین تخلیص شده، احتمالاً در شرایط طبیعی از لحاظ ایمونولوژیک، قابلیت کاربرد برای اهداف تحقیقی و تشخیصی را داراست. کلمات کلیدی : آنتی ژن core ویروس هپاتیت c ، ni-nta ، آرابینوز، پروموتر