همسانه سازی و بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس در باکتری e. coli
Abstract
زمینه و هدف: سیاهزخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل این بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس میباشد. آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس برای درمان و واکسن قابل استفاده می باشد. هدف این مطالعه بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس در باکتریe. coli میباشد. مواد و روش ها: قطعات ژنی مورد نظر از پلاسمید pxoi تکثیر و با عمل soeiong pcr قطعه بدست آمده در کلونینگ وکتور همسانهسازی گردید و بعد از جداسازی به وکتور pet28a(+) زیرهمسانهسازی و به باکتری e.coli سویه bl21(de3) تراریخت شد. بیان آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس تحت القایiptg انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتیژن حاصل در چهار نوبت به موشهای سوری تزریق شد. آنتیبادی پلیکلونال تولید شده در سرم موشها اندازهگیری گردید. یافته ها: آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس کلون شده در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیلهی pcr، آنالیز آنزیمی و توالی یابی تأیید گردید. پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکهگذاری وسترن تایید شد. سرم از خون موش جداسازی شد و تیتر آنتی بادی علیه pa تغییر یافته از طریق الایزای غیر مستقیم ارزیابی گردید. نتیجه گیری: پروتئین تولیدی دارای خاصیت مهار کنندگی بالایی برای فاکتورهای بیماریزای lf و ef می باشد. با توجه به شناسایی آنتی ژن pa بوسیله آنتی بادی آنتی ژن حفاظتی تغییر یافته باسیلوس آنتراسیس، میتوان بهصورت مجزا، یا ترکیبی با سایر دومن های pa در طراحی واکسن و بعنوان دارو برای درمان و پیشگیری بیماری سیاهزخم استفاده نمود.