تاثیر نانورشته پلی اِل لاکتیک اسید بر القاء کلونی زایی سلول های اسپرماتوگونی منجمد-یخ گشایی شده گوساله در محیط آزمایشگاه
Abstract
سابقه و هدف: ایجاد شرایط بهینه جهت کشت سلول های بنیادی اسپرماتوگونی در محیط آزمایشگاه، به کشف تمامی مکانیسم های مولکولی دخیل در اسپرماتوژنز و دستورزی در ژن ها کمک شایانی می نماید. هدف از انجام مطالعه ی حاضر بررسی تاثیر داربست نانو-رشته پلی ال لاکتیک اسید بر تکثیر سلول های اسپرماتوگونی منجمد یخ گشایی شده گوساله در محیط آزمایشگاه می باشد. مواد و روش ها: استخراج و تخلیص سلول ها از بیضه گوساله 3 تا 5 ماهه با روش هضم آنزیمی دو مرحله ای و حذف تمایزی صورت پذیرفت. سلول ها پس از انجماد و یخ گشایی در دو گروه مجزا کشت داده شدند: 1- گروه شاهد: کشت سلول به صورت ساده 2- گروه تیمار: کشت سلول ها بر روی نانورشته. سلول ها در محیط کشت dmem حاوی fbs 5 درصد و در حضور ng/ml gdnf40 به مدت 2 هفته کشت داده شدند. ارزیابی کلونی های اسپرماتوگونی در روزهای 4، 7، 10 و 13 کشت صورت پذیرفت. بیان ژن های (plzf, gfrα-1, vasa, itgα6, bcl6) با روش rt-pcr در روز پایانی کشت در تمامی گروه ها ارزیابی شد. نتایج: درصد حیات سلول ها پس از جداسازی و افزودن محلول انجماد به ترتیب 2/4±87/4 و 3/1±81/8 درصد بود که پس از یخ گشایی این میزان به 7/1±65 درصد کاهش یافت (0/01>p). مساحت کلونی های مشتق از اسپرماتوگونی گروه تیمار در مقایسه با گروه شاهد در روز 13 افزایش معنی دار داشت (0/05>p). در پایان کشت تمامی ژن های اختصاصی اسپرماتوگونی بیان شد. نتیجه گیری: آن گونه که از نتایج حاصل از این مطالعه برمی آید نانورشته پلی ال لاکتیک اسید، ریزمحیطی مناسب در جهت کشت سلول های منجمد- ذوب شده اسپرماتوگونی در محیط آزمایشگاه فراهم می آورد.