جداسازی و همسانه سازی (cloning) cdna ژن منگنز پراکسیداز (mnp) از قارچ خوراکی دکمه ای سفید (agaricus bisporus)، مقدمه ای بر دست ورزی ژنتیکی
Abstract
تولید و پرورش قارچ خوراکی، یکی از کاربردهای تجاری فناوری های میکروبی به منظور تبدیل زیستی ضایعات بخش کشاورزی به فرآورده های با ارزش غذایی است. در قارچ خوراکی دکمه ای ( agaricus bisporus ) آنزیم های مختلفی از ابتدای رشد میسلیومی تا انتهای دوره میوهدهی، تجزیه ترکیبات لیگنینی را در محیط کمپوست برعهده دارند. یکی از مهمترین این آنزیم ها، آنزیم منگنز پراکسیداز است که سهم عمدهای در تجزیه ترکیبات لیگنینی دارد. به منظور انجام مطالعات ملکولی بر روی آنزیم منگنز پراکسیداز در قارچ خوراکی دکمهای سفید نژاد im008 و آماده نمودن زمینه برای افزایش تولید این آنزیم در قارچ خوراکی دکمهای، اقدام به جداسازی و همسانه سازی cdna ژن کدکننده آنزیم منگنز پراکسیداز گردید. برای این منظور استخراج rna از میسلیومهای رشد یافته قارچ خوراکی بر روی محیط کشت مایع عصاره کمپوست انجام شد و cdna آن به وسیله آنزیم رونوشت بردار معکوس ساخته شد. پس از تکثیر قطعه مورد نظر به وسیله واکنش زنجیره ای پلیمراز، قطعه تکثیرشده در ناقل ptz57r/t قرار گرفت و سپس به باکتری e.coli سویه dh5α منتقل گشت. پس از استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخته، پلاسمید استخراج شده مورد هضم آنزیمی قرار گرفت و در مرحله آخر قطعه تکثیرشده تعیین توالی شد. در نتایج، بلاست توالی نوکلئوتیدی در مکانهای بازهای نوکلئوتیدی با شماره های 657 و 850 با توالی ژن mnp موجود در بانک اطلاعاتی ncbi تفاوت داشت که به ترتیب، سبب تغییر اسید آمینه ایزولوسین به والین و اسید آمینه سرین به آلانین در توالی اسیدآمینه قطعه cdna همسانه شده، میشود.