استفاده از آنتی بادی منوکلونال hs۸۰ جهت شناسایی پروتئین آنتی ژنیک آن
Abstract
مقدمه: از آنجایی که وقوع یک لقاح موفق نتیجه برهم کنش مناسب گیرنده ها و لیگاندهای مستقر در غشای دو سلول اسپرم و تخمک می باشد، بنابراین شناسایی وقایع مولکولی و گلیکوپروتئین های دخیل در این برهم کنش، با استفاده از آنتی بادی منوکلونال می تواند اطلاعات موجود در زمینه مکانیسم های دخیل در لقاح را افزایش داده و از طرف دیگر علت ناباروری های ناشی از نقایص مولکولی و یا ناباروری های با علت ایمونولوژیک را روشن سازد. روش کار: بعد از تولید آنتی بادی های منوکلونال علیه آنتی ژن های سطحی اسپرماتوزوای انسانی، جهت تولید انبوه آنتی بادی با کشت سلول هیبریدوم در صفاق موش و ایجاد آسیت، مقادیر زیادی آنتی بادی تولید گردید. آنتی ژن های سطحی اسپرم های نرمال با استفاده از دو ترکیب nacl و lis به طور جداگانه استخراج شد. جهت تعیین محل آنتی ژن مورد نظر، آزمون ایمونوفلورسانس غیرمستقیم با استفاده از آنتی بادی hs80 صورت گرفت. در ضمن به منظور تعیین وزن مولکولی آنتی ژن مورد نظر، آزمون ایمونوبلاتینگ پروتئین های استخراجی انجام شد. یافته ها: بعد از تزریق سلول هیبریدوم hs80 به صفاق هر موش حدود mg 5/13 آنتی بادی ازمجموع پنج موش به دست آمد. به دنبال رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس در ناحیه آکروزومی و در قسمت کوچکی از ناحیه گردن، فلورسانس درخشانی بین تمام جمعیت سلول های اسپرمی مشخص گردید. در عین حال بعد از آزمون ایمونوبلاتینگ، وزنی در محدوده 4 ±80 کیلو دالتون برای آنتی ژن مورد نظر ( hs80 ) محاسبه شد. نتیجه گیری: حضور آنتی ژن مزبور در ناحیه تحت استوایی سر اسپرم، احتمال داشتن نقشی در فرایندهای حیاتی اسپرم از جمله اتصال به غشای سیتوپلاسمی تخمک را در مورد این آنتی ژن افزایش می دهد و امکان دارد اتصال این آنتی بادی به اسپرم بتواند در شرایط فیزیولوژیک بر روند لقاح تأثیر محسوسی داشته باشد که می تواند این امر موضوع تحقیقات بعدی قرار گیرد.