تشخیص گونههای کریپتوسپوریدیوم جدا شده از انسان با روش pcr-rflp در تهران
Abstract
هدف: کریپتوسپوریدیوزیس از عفونتهای انگلی شایع در ایران و بهعنوان عامل ایجاد اسهال در انسان و دام بهشمار میآید. از این رو شناسایی گونههای شایع آن در جمعیتهای انسانی ضروری است. هدف از انجام مطالعه حاضر تعیین گونههای کریپتوسپوریدیوم جدا شده از بیماران مراجعه کننده به سه بیمارستان در تهران بر مبنای ژن 18s rrna با استفاده از روش nested pcr-rflp است. مواد و روشها: مطالعه حاضر از نوع توصیفی- مقطعی بوده و در مرحله اول جمعاً 1128 نمونه مدفوع انسانی از بیماران مراجعه کننده به سه بیمارستان علی اصغر، مفید و امام خمینی در تهران جمعآوری شد. سپس نمونهها با روش اسید فاست تغییر یافت و رنگآمیزی و تشخیص داده شد. در مرحله دوم dna نمونههای مثبت استخراج و ژنs rrna 18 با روش nested-pcr تکثیر، سپس برای تشخیص گونه، محصول pcr با آنزیم محدود کننده vsp1 برش داده شد در نهایت محصول pcr تعیین ترداف شد. نتایج: از نمونههای رنگآمیزی شده با ذیل نلسون تعداد 12 نمونه (06/1 درصد) مثبت تشخیص داده شد. همه این نمونهها با روش nested-pcr تأیید شد. قطعه تکثیر یافته 845 جفتبازی ژن 18s rrna با آنزیم vsp1 برش داده شد. پس از برش آنزیمی روی ژل آگارز 5/2 درصد، 10 نمونه بهعنوان کریپتوسپوریدیوم پاروم و بر مبنای الگوی برش آنزیمی و ترادف بازی یک نمونه بهعنوان کریپتوسپوریدیوم آندرسونی و یک نمونه بهعنوان کریپتوسپوریدیوم هومنیس تشخیص داده شد. نتیجهگیری: گرچه گونه پاروم بهعنوان گونه شایع در انسانها شناخته شده است ولی ممکن است افراد به گونه هومنیس و آندرسونی نیز مبتلا شوند.