طراحی، ساخت و ارزیابی بیان پلاسمید نوترکیب pires-igk/mil۱۸/fc با هدف استفاده در مطالعات واکسن

mohammah hassan pouriayevali، department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran arash reza memarnejadian، asisstant professor, department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran seyad mehdi sadat، ph.d., department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, mahdi zavva، department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran seyad davar siadat، associated professor, department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran christine hartoonian، ph.d, department of virology, pasteur institute of iran mohammad reza aghasadeghi

Abstract(in Persian; no English abstract is available)

هدف: اینترلوکین 18 سایتوکاینی است که نقش مهمی در پاسخ سلول‏های t کمکی نوع یک بازی می‏کند و بنابراین پلاسمید بیان کننده آن، به‏عنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی در زمینه مطالعه واکسن‏های dna به‏شمار می‏رود. در این مطالعه پلاسمید جفت بیانی کد کننده اینترلوکین 18، ترشحی (و به‏صورت متصل با قسمتی از fcγ2a) ساخته شد و بیان این سایتوکین نوترکیب ارزیابی شد. مواد و روش‏ها: rna از سلول‏های تحریک شده طحال موش استخراج و با استفاده از rt-pcr قطعات cdna متعلق به اینترلوکین 18 موشی (mil-18) و بخشی از توالی fcγ2a ساخته شد. در ادامه به منظور ساخت قطعه mil-18/fc ابتدا قطعات fc و اینترلوکین 18 موشی در پلاسمید psl1180 وارد شده و سپس این قطعه در پلاسمید psectag2a به منظور اضافه شدن توالی نشانه کاپای ایمنوگلبولین (igk) کلون شد. در نهایت igk/mil-18/fc درمیان سایت آنزیمی nhei/xmai، پایین دست ناحیه پروموتوری سیتومگالوویروس، در ناقل pires2-egfp کلون و پلاسمید pires-igk/mil-18/fc ساخته شد. سپس این پلاسمید در رده سلولی hek293t به‏وسیله محلول ترانسفکشن توربوفکت ترانسفکت شده و بیان آن با روش الایزا ارزیابی شد. نتایج: بررسی هضم آنزیمی پلاسمیدهای psl-mil-18، psl-mil-18/fc، psec-mil-18/fc و pires-igk/mil-18/f، با استفاده از آنزیم‏های اختصاصی مورد استفاده در کلونینگ، منجر به جداسازی قطعات مورد انتظار شد و سپس درستی ترادف و قالب بیان پلاسمید pires-igk/mil-18/f با روش توالی‏یابی تأیید شد. علاوه بر این بیان و ترشح سایتوکین نوترکیب در محلول رویی سلول‏های ترانسفکت شده hek293t در مقایسه با کنترل ترانسفکت تأیید شد. نتیجه‏گیری: در حالی‏که پلاسمید pires-igk/mil-18/fc قابلیت کلونینگ و بیان آنتی‏ژن مد نظر را داشته، همچنین قابلیت بیان پروتئین اینترلوکین 18 را به‏عنوان یک ادجوانت قوی ژنتیکی را به‏همراه دارد. این نتایج در طراحی یک واکسن dna کارا به‏منظور ارتقای پاسخ ایمنی سلولی مفید بوده و علاوه بر این هدفی جدید در راستای دستیابی به نسل جدید از واکسن dna به‏حساب می‏آید.