بررسی خصوصیات پاسخ شوک حرارتی در بروسلاملی تنسیس و واکنش پروتئین شوک حرارتی با سرم افراد بیمار و کنترلc

نور امیرمظفری، n. amir mozaffari, microbiology department. faculty of medicine.دانشکده پزشکی، گروه میکروب شناسی، فریده قاضی، f. ghazi, دانشکده پزشکی، گروه میکروب شناسی امرا... مصطفی زاده، a. mostafazadeh, دانشکده پزشکی، گروه میکروب شناسی و ایمنی شناسی، علی مصطفائی، a. mostafaii, دانشکده پزشکی، گروه میکروب شناسی و ایمنی شناسی، رمضان رجب نیا، r. rajabnia,

Abstract

زمینه و هدف: بروسلوز، یکی از مهمترین بیماریهای مشترک بین انسان و دام است که بر اثر آلودگی با باکتری های جنس بروسلا(بخصوص بروسلاملی تنسیس) به وجود می آید. وقتی بروسلا در معرض افزایش درجه حرارت قرار می گیرد، پروتئین های شوک حرارتی سنتز می کند. در این مطالعه، بروسلاملی تنسیس تحت شوک حرارتی در حرارتهای مختلف قرار می گیرد که تحت این شوک ها، (hsp)heat shock proteinها سنتز می شوند. سپس با استفاده از روش sds-page، الگوی سنتز hspها بررسی می شود. با استفاده از روش وسترن بلات، ایمونوژنیسیته hsp(hsp60) در مقابل سرم انسان بیمار و کنترل، مورد بررسی قرار می گیرد. هدف از این پژوهش، بررسی خصوصیات پاسخ شوک حرارتی در بروسلاملی تنسیس پس از شوک در حرارتهای مختلف است. روش بررسی: این مطالعه از نوع توصیفی تحلیلی می باشد. 5 باکتری بروسلاملی تنسیس از انسان جدا شد. سپس باکتری ها تحت شوک های حرارتی در 39، 40 و 42 درجه سلسیوس قرار گرفتند. استخراج پروتئین های بروسلا با سدیم دود سیل سولفات و لیزوزیم انجام شد. الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید در حضور سدیم دود سیل سولفات(sds-page) براساس روش لامی با بعضی تغییرات انجام گرفت. در نهایت با استفاده از روش وسترن بلات، ایمونوژنیسیته hsp(hsp60) در مقابل سرم انسان بیمار(مبتلا به بروسلوز) و کنترل مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: نتایج sds-page نشان داد که باندهای پروتئینی در محدوده وزنی 100-10 کیلودالتون قرار داشتند. عمده ترین باندهای پروتئینی، در محدوده وزنی 75-45 و 30-20 و 20-14 کیلودالتون قرار دارند. در باکتری های کنترل در محدوده 60 کیلودالتون، باندی مشاهده می شود که hsp60 می باشد که در حالت طبیعی(کنترل) مقدار آنها کم بود ولی در باکتری های شوک دیده، مقدار تولید آنها افزایش قابل چشمگیری داشته است. در واکنش پروتئین های پیکره بروسلاملی تنسیس شوک دیده با سرم افراد بیمار با وسترن بلات، چندین باند پروتئینی دیده می شود که در واکنش با سرم افراد کنترل، دیده نمی شود و در محدوده 10، 60 و 100 کیلودالتون می باشد. در واکنش پروتئین های پیکره بروسلاملی تنسیس شوک ندیده با سرم افراد بیمار، چندین باند پروتئینی دیده می شود که در واکنش پروتئین های با سرم افراد کنترل دیده نمی شود. نکته قابل توجه در واکنش پروتئین های پیکره بروسلاملی تنسیس شوک دیده با سرم افراد بیمار، وجود باند در ناحیه 60 کیلودالتونی در تمام نمونه هاست که این باند در واکنش پروتئین های پیکره بروسلاملی تنسیس شوک ندیده با سرم افراد بیمار، در بعضی نمونه ها دیده نمی شود یا ضعیف تر می باشد. در شوک های حرارتی 40 و 39 درجه سلسیوس، اختلافی در باندهای پروتئینی در sds-page در مقایسه با کنترل مشاهده نشده است. نتیجه گیری: نتایج بدست آمده در sds-page و وسترن بلاتینگ پروتئین های باکتری شوک دیده با سرم افراد بیمار و کنترل، نشان دهنده افزایش سطح تولید hspها در شرایط شوک و ایمونوژن بودن آنها به خصوص hsp60 می باشد و بیانگر واکنش سرولوژیک بدن انسان در مقابل hsp60 می باشد. احتمالاً می توان از hsp60 به عنوان آنتی ژن در تست الایزا یا در طراحی واکسن های زیرواحد استفاده کرد.