راه اندازی روش real-time pcr بر پایهgreen sybrجهت تعیین الل های hla-dq در بیماران مبتلا به سیلیاک

کاظم مشایخی، kazem mashayekhi gastroenterology and liver diseases research center, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran1- مرکز تحقیقات بیماری های گوارش و کبد، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران ، ایران محمد رستمی نژاد، mohammad rostami-nejad gastroenterology and liver diseases research center, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran1- مرکز تحقیقات بیماری های گوارش و کبد، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران ، ایران پدرام عظیم زاده، pedram azimzadeh gastroenterology and liver diseases research center, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran1- مرکز تحقیقات بیماری های گوارش و کبد، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران ، ایران داور امانی، davar amani department of immunology, faculty of medicine, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iranگروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران ، ایران شبنم کاظمیان، shabnam kazemian gastroenterology and liver diseases research center, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran1- مرکز تحقیقات بیماری های گوارش و کبد، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران ، ایران شقایق درخشانی، shaghayegh derakhshani gastroenterology and liver diseases research center, shahid beheshti university of medical sciences, tehran, iran1- مرکز تحقیقات بیماری های گوارش و کبد، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران ، ایران هادی حسن زاده

Abstract

سابقه و هدف: از عوامل ژنتیکی مهم در ابتلا به بیماری سیلیاک، حضور الل های hla-dq2 و hla-dq8 در افراد مبتلا می باشد. روش های مولکولی زیادی جهت تعیین این الل ها در دسترس می باشد اما این روش ها علاوه بر هزینه بالا، دارای مراحل متعددی هستند که استفاده از آن ها را دشوار کرده است، لذا هدف از این مطالعه، راه اندازی تکنیک ساده و سریع جهت تعیین الل های hla-dq در بیماران مبتلا به سیلیاک با روش sybr g reen r eal- t ime pcr بود. مواد و روش ها: به منظور تعیین نوع hla-dq و ارزیابی کارایی روش sybr g reen r eal- t ime pcr ، dna آن دسته از بیماران سیلیاکی که بیماری آن ها با استفاده از روش های سرولوژی و پاتولوژی تایید شده بود، استخراج شد. در مرحله بعد، از پرایمرهای اختصاصی جهت بررسی الل های hla-dqa1*05 ، hla-dqb1*02 و hla-dqb1*0302 استفاده شد و نتایج به دست آمده با کیت های تجاری در دسترس مقایسه گردید. یافته ها: با استفاده از این روش حضور الل های hla-dq2 و hla-dq8 با حساسیت و اختصاصی 100 درصد تعیین شد و نتایج حاصل از این روش در مقایسه با کیت های تجاری در دسترس با قدرت تفکیک پایین، کارایی بالاتری را نشان داد. نتیجه گیری: روش sybr g reen- r eal t ime pcr به همراه آنالیز منحنی ذوب آن، جهت شناسایی الل های hla-dq-2 و hla-dq8 کارایی مناسبی داشته و نسبت به روش های معمول hla تایپینگ در ایران، سریع تر و آسان تر بوده و برای تشخیص این الل ها، درجه حساسیت و اختصاصی بالایی دارد.