کلون کردن و بیان ژن m2e از ویروس آنفلونزای تیپ آ (h9n2)
Abstract
به منظور ایمنی وسیع الطیف بر علیه سویه ها و واریته های مختلف ویروس آنفلونزای تیپ a ، اخیرا پروتئین m2 از ویروس آنفلونزا محققان قرار گرفته است. لذا در این تحقیق orf ژن m2 از سوش واکسینال رازی (a/chicken/iran/101/1998 (h9n2 بکمک دو پرایمر اختصاصی که دارای سایتهای برشی برای آنزیمهایndei و ecori بودند و با استفاده ازتکنیک مولکولی rt-pcr دو مرحله ای تکثیر گردیده و در وکتور بیانی paed4 قرار داده و در باکتری (escherichia coli (xl1blue کلون گردید. سپس وکتور نوترکیب (paed4+m2) بکمک هضم آنزیمی ، تکنیک مولکولی وتعیین توالی تآئید گردید و در باکتری (escherichia coli bl21(de3 بیان شد. و در نهایت پروتئین تولید شده توسط sds-page مشخص و بوسیله وسترن بلاتینگ و بکمک آنتی بادیهای اختصاصی پلی کلونال از پروتئین m2مورد تائید نهائی قرار گرفت. مقایسه توالی این ژن با توالی های ثبت شده در بانک اطلاعات ژنی نشان داد که این ژن با تمام ایزوله ها ازتحت تیپ های h9 و h5 بویژه ایزوله هایی که در خاورمیانه در گردش هستند تشابه بسیار بالائی دارد و قسمت خارج غشائی این پروتئین که در تحریک سیستم ایمنی نقش دارد در تمام تحت تیپ ها یh9 و h5 ازویروس آنفلونزای a و در اکثر میزبانها تشابه 100% داشت . بنظر می رسد واکسن نوترکیب بر اساس پروتئین m2 از ایزوله (a/chicken/iran/101/1998 (h9n2 ممکن است ایمنی بالایی بر علیه تحت تیپ های h9 و h5 از ویروس آنفلونزای مرغی بویژه آنهائی که در خاورمیانه در گردش است ایجاد کند.