بررسی بیوشیمیایی و مولکولی ژنوتیپ های مختلف باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس در شهرستان کرمان
Abstract
کلستریدیوم پرفرینجنس مسئول ایجاد بیماریهای زیادی در انسان و حیوانات میباشد. این باکتری پنج تیپ مختلف دارد که هر کدام بیماریهای خاصی را موجب میشوند. جهت تشخیص تیپهای مختلف این باکتری روشهای متفاوتی وجود دارد که اکثراً دشوار، زمانبر و پرهزینه هستند و از حساسیت و اختصاصیت پایینی نیز برخوردارند. هدف از انجام این تحقیق استفاده از روشهای پیشرفته مولکولی جهت شناسایی ژنوتیپهای مختلف باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس در شهرستان کرمان میباشد. متأسفانه تاکنون هیچگونه تحقیق مستندی در این رابطه در ایران انجام نشده است. در این مطالعه 270 نمونه مدفوع از گوسفندان 20 روستا در اطراف کرمان به طور تصادفی و در دو مرحله گرفته شد. پس از فرآوری و کشت نمونهها، کلونیهای حاصل از نظر مورفولوژی و رنگآمیزی بررسی شدند و با استفاده از آزمونهای بیوشیمیایی، گونههای آنها شناسایی شد. آزمایشهای بیوشیمیایی انجام شده عبارت بودند از: آزمایش کاتالاز، هیدرولیز ژلاتین، هیدرولیز لستین، آزمون لیپاز، آزمون تولید اندول، آزمایش حرکت، واکنش شیر تورنسل دار و تخمیرکربوهیدراتها (ساکارز، گلوکز، لاکتوز و مالتوز). کلستریدیومهای جدا شده در این تحقیق 30 درصد نمونهها را شامل میشدند که عبارت بودند از کلستریدیومهای پرفرینجنس، باراتی، ابسونیوم، بیفرمنتانس، اسپورجنس، لپتوم، اورانتیبوتریکوم، اسپوراسفیریدس، سیمبیزوم، اسکاتولوجنس، راموزوم و سردلی. استخراج dna بر روی تمام گونههای کلستریدیوم جدا شده انجام شد. جهت تعیین تیپ باکتریهای جدا شده، از آزمون pcr با پرایمرهای اختصاصی هر تیپ استفاده گردید. تیپهای جدا شده باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس شامل 17/39% تیپ a، 21/74% تیپ b، 34/78% تیپ c، و 26/09% تیپ d بود که تیپ a برای اولین بار در ایران شناسایی گردید. در مطالعهای بین نمونههای نگهداری شده در یخچال و نمونههای تازه، اختلاف معنیدار زیادی (p<0/01) در جداسازی کلستریدیومها مشاهده شد. همچنین تأثیر تزریق واکسن آنتروتوکسمی بر جداسازی گونههای مختلف کلستریدیومهای رودهای بررسی شد و نتایج حاصله اثر معنیدار زیاد واکسیناسیون (p<0/01) روی کاهش جداسازی گونهی کلستریدیوم پرفرینجنس را نشان میدهد.
Supervisors and advisors
محمدرضا محمدآبادی، مهرداد شمس الدینی بافتی، مهدی حسنی درخشان