شناسایی همزمان بنزودیازپین ها در بعضی نوشیدنی های غیرالکلی با روش کروماتوگرافی مایع با کارکرد عالی (hplc)
Abstract
هدف از انجام این تحقیق، اجرا و بهینه سازی یک روش ساده، حساس و دقیق کروماتوگرافی مایع با کارکرد عالی(hplc) جهت آنالیز کمی و کیفی همزمان چندین بنزودیازپین (کلردیازپوکساید، دیازپام، کلونازپام، میدازولام، فلورازپام و لورازپام) در نمونه های نوشیدنی های غیرالکلی جهت آنالیزهای قانونی و بالینی می باشد. آماده سازی نمونه ها طی یک مرحله ساده و با تنظیم ph با استفاده از پتاسیم هیدروکساید و فیلتر نمودن آن انجام پذیرفت. جداسازی کروماتوگرافی با استفاده از ستون highchrom c-18 column (250mm×4.6 mm, 5µm) با دمای 45 درجه سانتیگراد و با استفاده از فاز متحرک متشکل از بافر پتاسیم دی هیدروژن فسفات 15 میلی مولارو متانول با نسبت های حجمی 50/50 در شرایط ایزوکراتیک و با سرعت جریان 4/1 میلی لیتر بر دقیقه انجام گرفت. دتکتورuv با طول موج 245 نانومتر انتخاب گردید. منحنی کالیبراسیون برای همه داروها در محدوده 5/0 تا 10 میکروگرم رسم گردید که برای همه ی داروها خطی و دارای ضریب رگرسیون بیشتر از 996/0 بودند. میزان بازیافت مطلق برای کلردیازپوکساید، کلونازپام، دیازپام، فلورازپام، لورازپام و میدازولام به ترتیب در محدوده 13/99 تا 106، 9/94 تا 99، 25/98 تا 7/108، 1/93 تا 69/103، 3/96 تا 6/99 و 96 تا 106 درصد قرار داشت. حداقل مقدار قابل شناسایی برای داروهای کلردیازپوکساید، کلونازپام، دیازپام و میدازولام برابر 01/0 و برای داروهای فلورازپام و لورازپام برابر 02/0 میکروگرم بر میلی لیتر محاسبه گردید. حداقل مقدار قابل اندازه گیری برای داروهای کلردیازپوکساید، کلونازپام، دیازپام و میدازولام برابر 03/0 و برای داروهای فلورازپام و لورازپام برابر 05/0 میکروگرم بر میلی لیتر محاسبه گردید. دقت تغییرات درون روزی و بین روزی برای همه داروها در همه غلظت ها در محدوده 45/0 تا 69/7 درصد بدست آمد. این روش جهت آنالیز نمونه های غیربیولوژیک در سم شناسی قانونی قابل استفاده می باشد.