بررسی فعالیت آنزیم لیپاز در دستگاه گوارش کرم قوزه پنبه helicoverpa armigera hb. (lep., noctuidae)
Abstract
پرورش این حشره در یکی از واحدهای گلخانه ای گروه گیاهپزشکی در دمای 2±26 درجه سانتی گراد، رطوبت نسبی 50 درصد و دوره نوری 16:8 (l:d) ساعت انجام شد. حشرات سه نسل بر روی ماده غذایی مصنوعی خالص-سازی شدند و از نسل چهارم برای آزمایشات مورد استفاده قرار گرفتند. فعالیت آنزیم لیپاز با استفاده از کیت لیپاز ساخت شرکت randox انگلستان اندازه گیری شد. آزمایشات دارای 14 تیمار بود که در سه تکرار و در قالب طرح کاملا تصادفی صورت گرفت. نمونه ها پس از تشریح و قرار گرفتن در بافر فسفات سرد،به مدت یک دقیقه هموژنه شده وسپس به مدت 10 دقیقه در 10 هزار دور سانتریفیوژگردید. بررسی میزان فعالیت آنزیم و سایر تیمارها توسط روش اسپکتروفتومتریک و اتوآنلایزر صورت گرفت. نتایج نشان داد بین مراحل مختلف نشو و نمایی سن ششم لاروی بیشترین فعالیت آنزیم لیپاز را داشت. بین فعالیت آنزیم در دماهای مختلف مورد بررسی، اختلاف معنی داری وجود داشت و بیشترین فعالیت آنزیم در دمای 40 درجه ی سانتی گراد مشاهده شد. ph بهینه ی فعالیت آنزیم لیپاز در این حشره برابر 9.5 به دست آمد. در دمای زیر 20- درجه ی سانتی گراد، فعالیت آنزیم در هفته ی هشتم به17 درصد مقدار آن در هفته ی اول رسید در حالیکه در دمای 4- درجه ی سانتی گراد فعالیت آنزیم پس از پنج هفته، 6 درصد مقدار آن در هفته ی اول بود و پس از آن کاملا متوقف گردید. نتایج مربوط به بررسی میزان فعالیت آنزیم در زمان های مختلف گرسنگی لاروها نشان داد که پس از 4 روز گرسنگی، فعالیت آنزیم کاهش پیدا کرده و تقریبا 9 درصد مقدار آن در حشرات تغذیه کرده بود. فعالیت آنزیم در طی ساعات مختلف شبانه روز متفاوت بود و در ساعت 12 ظهر و6 صبح به ترتیب بیشترین و کمترین میزان فعالیت آنزیم مشاهده شد. فعالیت آنزیم توسط اتانول96 درصد، غلظت های 3، 4 و 5 میلی مولار nacl و غلظت های 3، 4 و 5 میلی مولار cacl2 و غلظت های مختلف sds کاهش و به وسیله ی غلظت1 و 2 میلی مولار nacl و غلظت 5 میلی مولار فسفات پتاسیم افزایش یافت. غلظت های مختلف tris و edta و غلظت های تا 4 میلی مولار فسفات پتاسیم و نیز غلظت 25 درصد اتانول تاثیری روی فعالیت آنزیم نداشتند.