ViraScience.
Thesis

جداسازی، تعیین هویت و غنی سازی سلول های بنیادی اسپرم ساز جوجه و بررسی پتانسیل تمایزی و اسپرم زایی این سلول ها در آزمایشگاه

سجاد سی سخت نژاد

Abstract

امروزه، بعلت کاربردهای گسترده سلول های بنیادی اسپرم ساز ماکیان، دسترسی به این سلول ها از اهمیت بسیار بالایی برخوردار است. مطالعات اندکی در رابطه با جداسازی، تعیین هویت و غنی سازی این سلول ها در جوجه انجام شده است. بنابراین، این مطالعه با هدف بررسی الگوی بیان نشانگرهای مولکولی مختلف و بررسی قدرت بنیادینگی و همچنین تکثیر و خالص سازی جمعیت سلول های بنیادی اسپرم ساز جوجه 1 روزه در آزمایشگاه طراحی گردید. برای این منظور، روش هضم مکانیکی و کشت قطعات بیضه، برای دسترسی به سلول های بیضه جوجه استفاده شد. الگوی بیان نشانگرهای مولکولی مختلف در بیضه و کشت های سلولی حاصل از آن با استفاده از روش های rt-pcr، بررسی های ایمنوسیتوشیمی و فلوسایتومتری و آزمون فعالیت آلکالین فسفاتاز مورد بررسی قرار گرفت. همچنین قدرت بنیادینگی سلول های بنیادی اسپرم ساز جوجه طی کشت، بوسیله تمایز آنها به سلول های چربی، استخوانی و شبه نورونی با استفاده از محیط های تمایزی اختصاصی و همچنین بطور ویژه تمایز به اسپرماتوزوآ در نوعی سیستم کشت سه بعدی در آگار نرم (3d-sacs)، مورد بررسی قرار گرفت. بعلاوه، از طریق جایگزینی سرم با b27 و غنی سازی محیط کشت با ترکیبی از فاکتورهای رشد مختلف (gdnf، bfgf، egf و (lif، شرایط کشت مناسب جهت توسعه و خالص سازی جمعیت سلول های بنیادی اسپرم ساز فراهم شد. نتایج حاصل از این مطالعه، وجود ردیف ها، خوشه ها و کلونی های سلولی مرتبط با سلول های بنیادی اسپرم ساز را در کشت های سلولی حاصل از بیضه نشان داد. بعلاوه، مشخص شد که سلول های تشکیل دهنده کلونی برای فعالیت آلکالین فسفاتاز و بیان نشانگرهای pou5f1 (oct4/cpouv) و gpr125 در سطح پروتئین مثبت، اما برای ssea-1 منفی بودند. ژن هایc-kit، thy-1، gpr125، nanog، pou5f1، gdnf، gfr?1، spry-1، plzf، cvh، stra-8، dazl، bcl6b و asz-1 را در سطح رونوشت بیان می کردند. بعلاوه، بررسی تمایز سلول های حاصل از بیضه جوجه به سلول های چربی، استخوانی، شبه نورون و اسپرم نیز نشان داد که سلول های تشکیل دهنده کلونی موجود در این کشت ها، نه تنها بنیادینگی خود را در کشت حفظ کرده، بلکه همچنین پتانسیل چند توانی نیز دارند. همچنین، این مطالعه حاکی از آن بود که کشت سلول های بیضه ای جوجه در محیط کشت فاقد سرم و غنی شده با فاکتورهای ذکر شده در بالا، بدون استفاده از لایه مغذی sto و بستر پوشیده شده با ژلاتین، از یک سو منجر به تکثیر شدید (صدها برابری) سلول های تشکیل دهنده کلونی و از سوی دیگر حذف تدریجی دیگر سلول های بیضه ای، در مقایسه با کشت های کنترل گردید. بطور کلی، این مطالعه نه تنها مبین یک روش کشت کارآمد معمول در آزمایشگاه برای دسترسی به تعداد فراوان سلول های بنیادی اسپرم ساز جوجه می باشد، بلکه همچنین دیدگاه جدیدی را در رابطه با الگوی بیان نشانگرهای مولکولی سلول های اسپرماتوگونیا، به ویژه سلول های بنیادی اسپرم ساز، در بافت بیضه جوجه 1 روزه و کشت های سلولی حاصل از آن ایجاد می نماید. از سوی دیگر، این مطالعه برای اولین بار روش موفقیت آمیزی را برای القاء فرآیند اسپرم زایی در آزمایشگاه و تولید سلول های شبه اسپرم از سلول های کشت شده بیضه جوجه، ارائه نموده است.

Supervisors and advisors

مریم مقدم متین، احمد رضا بهرامی، حسام دهقانی

Similar items

  • جداسازی، تکثیر و غنی‏سازی سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد در روش هم‏کشتی با سلول‏های سرتولی اتولوگ

    Articleپژوهش های آسیب شناسی زیستیsetareh javanmardi، ph.d. candidate, department of anatomy, faculty of medicine, baqiyatallah university of medical sciences, tehran, iran mohammad hossein asadi، professor, department of anatomy, faculty of medicine, baqiyatallah university of medical sciences, tehran, iran mansoureh movahedin، professor, department of anatomy, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran

    هدف: ارایه یک روش ساده برای جداسازی، تکثیر و غنی‏سازی سلول‏های بنیادی اسپرماتوگونی موش نوزاد مواد و روش‏ها: سوسپانسیون سلولی حاوی سلول‏های اسپرماتوگونی و سرتولی با استفاده از هضم آنزیمی از بیضه موش نوزاد دو روزه جداسازی شد. سلول‏ها به صورت هم‏کشتی و در محیط کشت dmem/f12 حاوی 10 د

  • جداسازی، تعیین هویت و ذخیره استاندارد سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی و پالپ دندان انسان

    Article2017مجله علوم پزشکی رازیاسدی, معصومه، اشوری, سپیده، الیاسی, زهرا، ایزدپناه, مهرناز

    Background: Due to extensive use of cell cultures in biomedical investigations and researches, there has been a great need to identify, authenticize and accurate quality control of cells. Stem cells are characterized by their self-renewal and differentiation potential. Mesenchyma

  • جداسازی و تعیین هویت سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی

    Articleکومشسعید سلالی، saeed solali hematology dept, medical science faculty, tarbiatmodares university, tehran, iranگروه هماتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران سعید کاویانی، saeed kaviani hematology dept, medical science faculty, tarbiatmodares university, tehran, iranگروه هماتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران مسعود سلیمانی، masoud soleimani hematology dept, medical science faculty, tarbiatmodares university, tehran, iranگروه هماتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران زهرا ذنوبی

    سابقه و هدف: سلول های بنیادی مزانشیمی (mesenchymal stem cell, msc) گروهی از سلول های بنیادی بالغین هستند که به صورت طبیعی در بدن وجود داشته و حضور این سلول ها در بافت های مختلف گزارش شده است. امروزه به دلیل قابلیت ذاتی این سلول ها در تمایز به رده های مختلف، توجه زیادی را در زمینه

  • جداسازی، تکثیر و تعیین هویت سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی انسان

    Articleمجله دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی تهرانصنمبر صدیقی، sanambar sadighi department of internal medicine, cancer research center, tehran university of medical sciences, tehran, iran.گروه داخلی، مرکز تحقیقات سرطان، دانشگاه علوم پزشکی تهران احد خوش زبان، ahad khoshzban department of dental materials, school of dentistry, tehran university, tehran, iran.گروه مواد دندانی، دانشکده دندانپزشکی، دانشگاه تهران امیرحسین توکلی، amir hossein tavakoli tissue bank and research center, tehran university of medical sciences, tehran, iran.مرکز تحقیقات و بانک فرآورده های پیوندی دانشگاه علوم پزشکی تهران رامین خطیب سمنانی

    زمینه و هدف: فن آوری بافت چربی به دلیل فراوانی و دسترسی آسان طی روند لیپوساکشن، منبع ایده آلی برای تهیه سلول های بنیادی مزانشیمی و تهیه داربست های طبیعی فراهم می آورد که موجب ترمیم و بازسازی مناسب بافت صدمه دیده نسج نرم می شوند. هدف این مطالعه جداسازی و تکثیر و شناسایی سلول های ب

  • جداسازی و تعیین هویت سلول های بنیادی خونساز و مزانشیمی مشتق از بافت جفت انسانی

    Articleفصلنامه پژوهشی خونآزاده امیدخدا، a. omidkhoda دانشگاه تربیت مدرس سعید کاویانی، s. kaviani دانشیار دانشکده پزشکی دانشگاه تربیت مدرسسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (tarbiat modares university) مسعود سلیمانی، m. soleimani دانشگاه تربیت مدرسسازمان اصلی تایید شده: دانشگاه تربیت مدرس (tarbiat modares university) مهین نیکوگفتار ظریف

    چکید ه سابقه و هدف فراوانی کم سلول های بنیادی خونساز در خون بند ناف، مهم ترین فاکتور محدود کننده استفاده از این منبع در پیوند می باشد. اگر بتوان سلول های بنیادی خونساز و مزانشیمی موجود در جفت را جداسازی و به همراه سلول های خون بند ناف پیوند کرد، مشکل فراوانی کم سلول ها به دلیل اف

  • جداسازی، کشت و تعیین هویت سلول های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت سینوویوم زانوی انسان

    Thesis2008وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه پیام نورمریم درویشی

    چکیده ندارد.