ساخت کاست ژنی با به کارگیری تلفیقی از ژنوم کدکننده ag85b و tb10.4 مایکوباکتریوم توبرکولوزیس سویه h37rv به منظور طراحی واکسن dna
Abstract
علی رغم استفاده از واکسن ب.ث.ژ از سال 1921 تا به حال، هنوز بیماری سل به عنوان دومین عامل مرگ ومیر در بین بیماریهای عفونی محسوب می گردد. با افزایش مقاومت عامل مولد سل (mycobacterium tuberculosis) به آنتی بیوتیک های معمول و وسیع الطیف و همچنین با ظهور hiv و عفونت این ویروس با مایکوباکتریوم توبرکولوزیس، مقابله با این بیماری بیشتر به چالش کشیده شده است. شناخت آنتی ژنهای موثر در ایمنی زایی محافظتی می تواند به عنوان کاندیدی برای طراحی واکسنهای نوین باشد. از جمله این آنتی ژنها ag85b و tb10.4 می باشد که با وزن مولکولی به ترتیب 30 و 10کیلودالتون توسط لنفوسیتهای t شناخته شده و سبب القاء پاسخ قوی th1 و درنتیجه بالا بردن تولید if-? می گردند. هدف از این تحقیق، ساخت کاست ژنی حاصل از تلفیق دو ژن فوق در درون وکتور pcdna3 می باشد. dna متعلق به مایکوباکتریوم توبرکولوزیس سویه h37rv به روش روتین استخراج گردید. ژنوم کدکننده این دو آنتی ژن توسط پرایمرهای اختصاصی به روش pcr تکثیر و سپس تلفیق گردید و پس از هضم آنزیمی درون وکتور یوکاریوتی pcdna3 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب فوق در باکتری e.coli dh5? ترنسفورم گردید و پس از تخلیص، توسط آنالیز آنزیمی و توالی یابی مورد تایید واقع شد. نتایج تعیین توالی و آنالیز آنزیمی تایید نمود که کلونینگ با موفقیت انجام شده است. قطعات tb10.4 و ag85b ترکیب گردید و در وکتور pcdna3 با موفقیت کلون گردید. در مطالعات بعدی می توان بیان ژن را در رده سلولی ارزیابی نمود و از این کاست ژنی به عنوان واکسن dna استفاده نمود.