ساب کلونینگ ژن زیر‌واحد آلفای هورمون‌های گلیکوپروتئینی بخش پیشین غده هیپوفیز در یک وکتور بیانی سلول‌های پستان‌داران

نویسندگان

  • قدمیاری , مجتبی دانشگاه علوم پزشکی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی
  • اکبری عیدگاهی, محمد‌رضا دانشگاه علوم پزشکی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی
  • شعبانی, علی‌اکبر دانشگاه علوم پزشکی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی
  • نصر, رضا دانشگاه علوم پزشکی سمنان، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی
چکیده مقاله:

  سابقه و هدف: هورمون‌های گلیکوپروتئینی مترشحه از هیپوفیز قدامی شامل هورمون‌های گلیکوپروتئینی انسانی شامل هورمون محرک تیروئید، هورمون لوتئینیزه‌ کننده، هومون محرک فولیکولی و گونادوتروپین کوریونی هستند که هر یک از دو زیر‌واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیر‌واحد آلفا در همه هورمون‌های فوق مشابه است و از چهار اگزون و سه اینترون تشکیل شده است. زیر واحد بتا مسئول فعالیت اختصاصی هر یک از این هورمون‌ها است. هدف این مطالعه کلونینگ cDNA زنجیره آلفای هورمون‌های گلیکوپروتئینی در وکتور مناسب برای سیستم یوکاریوتی بود.   مواد و روش ‌ ها: به منظور کلونینگ cDNA زیر‌واحد آلفا هورمون‌های گلیکوپروتئینی از T-vector واجد ژن آلفا، به کمک یک جفت پرایمر، cDNA مجدداً آمپلیفیه گردید و در سایت‌های Bam HI و Not I پلاسمید pcDNA3.1 کلون گردید. پلاسمید نوترکیب به سلول E.coli Top10F  ترانسفورم شد و کلونی‌های واجد پلاسمید به‌وسیله Colony PCR انتخاب شدند. صحت پلاسمید تخلیص شده از این کلون‌ها ابتدا توسط هضم آنزیمی و نهایتاً به روش سکانسینگ بررسی شد.   یافته ‌ ها: آنالیز آنزیمی و سکانسینگ نشان داد که پلاسمید pcDNA3.1-F351 α دارای توالی پلاسمیدی صحیح می‌باشد و تطابق کامل با ژن آلفای هورمون‌های گلیکوپروتئینی گزارش شده در GenBank دارد.   نتیجه ‌ گیری: این پلاسمید به دلیل ساختار صحیح جهت انتقال به سیستم یوکاریوتی و ارزیابی بیان مناسب می‌باشد.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

ساب کلونینگ ژن زیر واحد آلفای هورمون های گلیکوپروتئینی بخش پیشین غده هیپوفیز در یک وکتور بیانی سلول های پستان داران

سابقه و هدف: هورمون های گلیکوپروتئینی مترشحه از هیپوفیز قدامی شامل هورمون های گلیکوپروتئینی انسانی شامل هورمون محرک تیروئید، هورمون لوتئینیزه کننده، هومون محرک فولیکولی و گونادوتروپین کوریونی هستند که هر یک از دو زیر واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیر واحد آلفا در همه هورمون های فوق مشابه است و از چهار اگزون و سه اینترون تشکیل شده است. زیر واحد بتا مسئول فعالیت اختصاصی هر یک از این هورمون ها اس...

متن کامل

جداسازی و کلونینگ ژن فولیکول استیمولایتینگ هورمون انسانی hFSH با سیگنال سکانس طبیعی ژن در شاتل وکتورpPIC9 مخمر متیلوتروف Pichia pastoris

سابقه و هدف: فولیکول استیمولاتینگ هورمون (FSH) از خانواده هورمون‌های گلیکوپروتئینی هیپوفیز و متشکل از دو زیرواحد آلفا و بتا می‌باشد که فعالیت بیولوژیک این هورمون مربوط به زیرواحد بتای آن است. این مطالعه به منظورجداسازی ناحیه کدکننده ژن انسانی FSHβ با سیگنال سکانس طبیعی ژن و کلونینگ آن در شاتل وکتورpPIC9 تحت پروموتر AOX1 و سیگنال سکانس آلفا فاکتور انجام شد. مواد و روش‌ها: طی دو مرحله امپلیفیکا...

متن کامل

ساب کلونینگ ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز موش سوری در وکتور لنتی ویرال و انتقال آن به رده سلولی HEK

سابقه و هدف: ژن‌درمانی یکی از مهم­ترین شیوه‌های تحقیقات بالینی است که ارایه‌دهنده­ی روش‌های جدیدی برای درمان نقص‌های ژنتیکی می‌باشد. نقص ژنتیکی آنزیم گلوکوسربروزیداز ( Gba ) عامل بیماری گوشه بیش از بقیه‌ی بیماری‌ها در ژن‌درمانی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از انجام این پروژه کلونینگ و انتقال ژن آنزیم گلوکوسربروزیداز توسط لنتی ویرال وکتور ارتقایافته به رده‌ی سلول‌های HEK می‌باشد. مواد و روش‌ها:...

متن کامل

کلونینگ ژن هورمون رشد (GH) فیل ماهی (Huso huso) در سازه های لنتی ویروسی و غیر ویروسی و بررسی بیان ژن در سلولهای بنیادی جنینی انسانی

یکی از مهمترین کاربردهای مهندسی ژنتیک در تحقیقات آبزی پروری، افزایش میزان رشد ماهیان پرورشی از طریق انتقال ترنس ژنهای هورمون رشد به آنهاست. اما پیش از هر گونه تلاش در جهت انتقال ژن، ساخت و سنتز این ترنس ژنهای مطلوب الزامی است. از این رو در این تحقیق، ابتدا لنتی ویروس های نوترکیب حاوی ژن هورمون رشد (GH)فیل ماهی Huso huso به عنوان یکی از مهمترین گونه های ماهیان خاویاری تولید شد، سپس از آنها برای ...

متن کامل

کلونینگ و بررسی بیان ژن hcpD هلیکوباکتر پیلوری

زمینه و هدف: ژن hcpD به عنوان یکی از ژن های کد کننده خانواده پروتئین های غنی از سیستئین هلیکوباکتر پیلوری است. این دسته از پروتئینها سبب تحریک سیستم ایمنی میزبان و تولید آنتی بادی میگردند. هلیکوباکتر پیلوری مستقر در معده انسان سبب بیماریهای گوارشی نظیر: زخم دوازدهه، گاستریت مزمن و سرطان معده میشود. هدف از این مطالعه، تکثیر، جداسازی و همسانه سازی ژن hcpD هلیکوباکتر پیلوری در وکتور pcDNA3.1(-) و ...

متن کامل

ساخت وکتور بیانی pcdna۳.۱-fshβ به منظور انتقال ژن زیر واحد fshβ به سلول لاین پستان داران

سابقه و هدف: هورمون محرک فولیکولی (follicle stimulating hormone, fsh)، یکی از هورمون های گلیکوپروتئینی هیپوفیز است که از دو زیر واحد آلفا و بتا تشکیل شده است. زیرواحد بتا حاوی 111 اسیدآمینه و یک سیگنال پپتید 18 اسیدآمینه ای و مسئول فعالیت بیولوژیکی هورمون می باشد. هدف از این مطالعه ساخت وکتور بیانی pcdna3.1-fshβ به منظور انتقال ژن زیر واحد fshβ به سلول لاین پستانداران بود. مواد و روش ها: ابتدا ...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


عنوان ژورنال

دوره 13  شماره 2

صفحات  143- 150

تاریخ انتشار 2012-01

با دنبال کردن یک ژورنال هنگامی که شماره جدید این ژورنال منتشر می شود به شما از طریق ایمیل اطلاع داده می شود.

کلمات کلیدی

کلمات کلیدی برای این مقاله ارائه نشده است

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023