OPTIMIZATION OF DIPHTHERIA TOXOID PRECIPITATION BY USING SATURATED AMMONIUM SULPHATE IN ORDER TO IMPROVE DIPHTHERIA VACCINE

سابقه و هدف: کورینه باکتریوم دیفتریه باکتری هوازی و بی­هوازی اختیاری است. مهم­ترین گونه از خانواده کورینه ‌باکتریاها، عامل بیماری دیفتری است که به ­وسیله توکسین خود، بیماری دیفتری را ایجاد می­کند. آمونیم ­سولفات نمکی معدنی است که از آن برای ترسیب و خالص­سازی پروتئین ها استفاده می­شود که با افزایش مقدار نمک حلالیت پروتئینی کم شده و پروتئین ­ها به­ واسطه قطعه­ های هیدروفوب خود، به­هم پیوسته و رسوب می­کنند. واکسن دیفتری از طریق تخلیص و ترسیب توکسوئید باکتری دیفتری تهیه می­ شود که از جمله روش­های ترسیب، استفاده از آمونیوم ­سولفات به­صورت نمک خشک و یا تهیه محلول فوق اشباع از آن است. مواد و روش ­ها: کشت باکتری دیفتری در شرایط بهینه و مغذی سبب افزایش تولید توکسین توسط باکتری می­شود و بعد از غیرفعال­ سازی توکسین و تبدیل آن به توکسوئید در صنایع تولید واکسن مورد استفاده قرار می­گیرد. کلیه محیط­های کشت باید حداقل به­مدت 24 ساعت در حرارت 37-35 درجه سانتی­گراد انکوبه شوند. به ­منظور ترسیب توکسوئید باکتری از محلول فوق اشباع 32/4 مولار آمونیوم با درصدهای مختلف سولفات استفاده شد. نتایج به­دست آمده از این روش باSDS PAGE و (Lateral flow test) Lf TEST مورد بررسی قرار گرفت. یافته­ها: استفاده از آمونیوم­سولفات فوق اشباع32/4 مولار به­ جای استفاده از نمک خشک آمونیوم­سولفات که در روش سنتی (WHO TRS, No.980) که قبل در صنایع واکسن ­سازی مورد استفاده قرار می­گرفت، باعث حذف مرحله طولانی مدت دیالیز شده و از طرفی هدر رفت محصول نهایی (توکسوئید) را به ­صورت کامل محسوس کاهش داده و هم­چنین باعث حذف ناخالصی ­های ناخواسته از محصول نهایی شده و محصول نهایی خالص ­تر را در مقیاس بیش­تر در اختیار قرار داده است. نتیجه ­گیری: از آنجایی­که هدف در صنایع تولید واکسن، دست­یابی به مقدار حداکثری توکسوئید از این باکتری است لذا استفاده از آمونیوم­ سولفات فوق اشباع 32/4 مولار برای ترسیب توکسوئید دیفتری به­ جای استفاده از نمک خشک آمونیوم ­سولفات باعث کاهش هدر رفت محصول نهایی و حذف مرحله زمان بر و غیر اقتصادی دیالیز شده و از نظر اقتصادی نیز مقرون به صرفه­ تر خواهد بود.