شناسایی مورفولوژیک و مولکولی عامل بوته میری خیار در رفسنجان

بیماری بوته­میری خیار از جمله عوامل محدود کننده کشت خیار که باعث خسارت قابل توجهی در گلخانه های تجاری می­شود. به منظور شناسایی عوامل بیماری زا، نمونه برداری و جداسازی عامل بیماری طی سال های 1388 تا 1390 از گلخانه های تجاری خیار در رفسنجان انجام شد. تعداد 23 جدایه پیتیوم با استفاده از محیط کشت انتخابی جداسازی و بیماریزایی جدایه ها روی گیاهچه های خیار ارزیابی و اثبات گردید. شناسایی بیمارگر بر­اساس ریخت شناسی پرگنه، ویژگی­های میکروسکوپی و روش مولکولی انجام شد. بر اساس ویژگی­های میکروسکوپی گونه p. aphanidermatumشناسایی گردید. توالی نوکلئوتیدی دی ان ای ناحیه ترانوبسی شونده داخلی ریبوزومی (rdna-its) جدایه های انتخابی تعیین و به بانک ژن ارسال گردید.جستجوی تشابه با genbank-blast با استفاده از توالی­ ناحیه rdna-its نشان داد کهp. aphanidermatumثبت شده در بانک ژن با شماره ثبت ab355599 شبیه­ترین توالی (بیش از99درصد تشابه) به جدایه به دست آمده می­باشد. شناسایی و ردیابی مولکولی p. aphanidermatum از بافت آلوده بر اساس تکثیر قطعه اختصاصی از ناحیه rdna-its با استفاده از آغازگراختصاصی paph54f/its2 انجام و اختصاصیت و حساسیت آغازگر بررسی شد. نتایج نشان داد که جفت آغازگر مزبور برای ردیابی بیمارگر p. aphanidermatum بسیار اختصاصی و قادر به تکثیر قطعه 200 جفت بازی می­باشد. از طرفی قادر به ردیابی کمتر از fg200 از dna خالص بیمارگر در pcr معمولی می باشد. استفاده از آغازگرطراحی شده زمینه ردیابی p. aphanidermatum از بافت، آلوده را فراهم ­می­نماید و هیچ باندی در تکثیر با dna به دست آمده از بافت خیار سالم دیده نمی شود.