تولید و تخلیص آنتیبادی پلیکلونال علیه تتانوتوکسین
Abstract
مقدمه: کزاز نوعی بیماری دستگاه اعصاب است که با افزایش صلابت و گرفتگی های عضلات مشخص می شود. عامل این بیماری کشنده، توکسین کلستریدیوم تتانی می باشد. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره l، hn و hc می باشد. زنجیره hc بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندید واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه استفاده از ژن صناعی زنجیره hc تتانواسپاسمین و بررسی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب حاصل از آن و نهایتاً تهیه سرم و آنتی بادی پلی کلونال علیه آن می باشد. مواد و روش ها: از میزبانe. coli bl21 de3 ، دارای وکتور pet28a حامل ژن نوترکیب زنجیره hc تتانوتوکسین، جهت بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب مورد مطالعه استفاده شد. ایمنی زایی آن در حیوان آزمایشگاهی صورت گرفت. ضمن بررسی تیتر آنتی بادی، آنتی بادی پلی کلونال علیه تتانوتوکسین از سرم تخلیص گردید. یافته ها: پس از بهینه سازی بیان و تخلیص، پروتئین نوترکیب بیانی حاصل با وسترن بلاتینگ تأیید گردید. ایمنی زایی در مدل موش نشان از تیتر بالای آنتی بادی علیه پروتئین نوترکیب داشت. تخلیص آنتی بادی پلی کلونال از سرم حیوانات ایمن به روش ستون g انجام گردید. نتیجه گیری: تولید پروتئین نوترکیب بخش hc و بررسی ایمنی زایی آن، نشان دهنده تیتر بالایی از آنتی بادی پلی کلونال در سرم حیوان علیه تتانوتوکسین می باشد.