بیان نوترکیب و تخلیص ناحیه ۱ فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس در escherichia coli و تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه آن در موش سوری
Abstract
زمینه و هدف: سیاهزخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری، باکتری باسیلوس آنتراسیس میباشد که آنتیژن حفاظتکننده و ناحیه یک فاکتور کشنده (lfd1) ایمونوژنهای قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شدهاند. هدف این مطالعه بیان و تخلیص lfd1 در باکتری escherichia coli و تولید آنتیبادی پلیکلونال علیه آن در موش سوری میباشد. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، ژن lfd1 با جایگاههای برش آنزیمی bamhi و xhoi با واکنش pcr تکثیر و بعد از جداسازی، در وکتور بیانی pet28a(+) همسانهسازی گردید. به منظور بیان ژن، این وکتور به باکتریهای صلاحیتدار e.coli-bl21(de3)plyss تراریخت شد. بیان ژن lfd1 تحت القایiptg انجام و بعد از تخلیص پروتئین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتیژن حاصل در چهار نوبت به موشهای سوری تزریق شد. آنتیبادی پلیکلونال تولید شده در سرم موشها اندازهگیری گردید. یافتهها: ژن lfd1 کلون شده در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله pcr، هضم آنزیمی و توالییابی تأیید شد. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکهگذاری وسترن تایید گردید. در نهایت آنتیبادی پلیکلونال تولید شده از سرم موش سوری جدا شده و به وسیله تست الایزا ارزیابی و تأیید گردید. نتیجهگیری: با توجه به بیان مناسب، تولید آسان این آنتیژن و تیتر آنتیبادی پلیکلونال تولید شده علیه آنتیژن lfd1 به دلیل ایمونوژنیسیته آن در موشهای سوری، میتوان آن را به عنوان کاندید واکسن علیه سیاهزخم در نظر گرفت.