راه‌اندازی روش RT-Nested PCR به منظور تشخیص ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک

Authors

  • دوزنده, جواد
  • صباحی, فرزانه
  • عامل جامه‌دار, سعید
Abstract:

  چکید ه   سابقه و هدف   ویروس نقص ایمنی اکتسابی تیپ یک( HIV-1 ) عامل ایجاد کننده سندرم نقص ایمنی اکتسابی انسانی”ایدز” می‌باشد. انتقال بیماری از طریق انتقال خون در دوره پنجره، در مراکز انتقال خون یک معضل جهانی محسوب می‌شود. علاوه بر این، نیاز مبرمی برای تشخیص سریع، حساس و دقیق عفونت HIV-1 قبل از ظهور آنتی‌بادی در بدن فرد آلوده در بیمارستان‌ها و مراکز بهداشتی احساس می‌شود. تشخیص ژنوم ویروس HIV-1 در نمونه‌های مشکوک، باعث جلوگیری از گسترش بیماری در جامعه و شیوع روز افزون بیماری خواهد بود. با استفاده از این روش می‌توان عفونت را در مراحل ابتدایی و قبل از ظهور آنتی‌بادی‌های اختصاصی تشخیص داد. هدف از این پژوهش طراحی روش بسیار حساس و سریع RT-Nested PCR جهت تشخیص عفونت HIV-1 بود.   مواد وروش‌ها   پژوهش انجام گرفته از نوع بنیادی ـ کاربردی بود. روش RT-Nested PCR به منظور جداسازی سکانسی حفاظت شده از بخش ژن gag در ویروس HIV-1 طراحی و به کار گرفته شد. ابتدا با کمک روش ترانس‌کریپتاز معکوس، از روی ژنوم RNA ویروس، cDNA ساخته و پس از آن با روش Nested-PCR با استفاده از دو جفت آغازگر اختصاصی و در دو مرحله، قطعه‌ای از ژن مورد نظر ویروس HIV-1 تکثیر داده شد و با کمک الکتروفورز، محصولات PCR مورد بررسی قرار گرفت. نتایج به دست آمده با کمک آزمون ANOVA و نرم ‌افزار آماری SPSS تجزیه و تحلیل گردید.   یافته‌ها   تعداد 25 نمونه سرمی از مراحل مختلف عفونت(شامل مراحل بدون علامت، علامت‌دار و ایدز) و هم‌چنین 15 نمونه پانل استاندارد و 20 نمونه سرمی منفی جمع‌آوری شد و با روش فوق مورد بررسی قرار گرفت. در تمام موارد مثبت، باند مورد نظر بر روی ژل آگارز مشاهده شد، ضمن این که در هیچ کدام از نمونه‌های منفی، باندی مشاهده نگردید.   نتیجه گیری   بر اساس نتایج به دست آمده در این پژوهش، نشان داده شد که روش راه‌اندازی شده دارای حساسیت و اختصاصیت بالایی جهت تشخیص عفونت ویروس HIV-1 می‌باشد. هم‌چنین با توجه به حساسیت روش، به نظر می‌رسد که ژنوم ویروسی را می‌توان قبل از تغییرات سرمی و ظهور آنتی‌بادی‌ها تشخیص داد و از این رو می‌توان دوره پنجره‌ تشخیص عفونت را کوتاه‌تر کرد.   کلمات کلیدی : PCR دوگانه، RT-PCR ، ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی تیپ یک، ژن gag  

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بررسی بیماری لیشمانیوز احشایی در گربه های ولگرد آلوده به ویروس نقص ایمنی اکتسابی شهر کرمان به روش nested pcr

لیشمانیوز احشایی (کالاآزار) بیماری مشترک کشنده ای است که در اغلب مناطق ایران به صورت اسپورادیک و در برخی استانها نظیر اردبیل، آذربایجان شرقی و فارس و از جمله، استان کرمان به صورت اندمیک دیده می شود. سگها به عنوان مخازن اصلی بیماری در ایران مطرح هستند، اماگزارش وقوع آلودگی در گربه ها در استان های فارس وآذربایجان شرقی، احتمال نقش داشتن گربه ها دراپیدمیولوژی بیماری را در ایران عنوان می سازد. مرور ...

تولید ویروس کاذب نقص ایمنی اکتسابی انسان

انتقال ژن خارجی به سلول ها با اهداف مختلف تحقیقاتی و درمانی و با بکارگیری سه روش فیزیکی، شیمیایی و زیستی صورت می گیرد. روش زیستی یا انتقال ژن با استفاده از ناقل های ویروسی یکی از پرکاربردترین روش های انتقال ژن در کارآزمایی هایی بالینی است. ناقل های لنتی ویروسی بر پایه جنس لنتی ویروس از خانواده رتروویریده تولید می شوند و ناقل های بر مبنای hiv-1 از پرکاربردترین این ناقل ها هستند. علت توجه به این ...

15 صفحه اول

مقایسه RT-PCR ‌با جداسازی ویروس در تشخیص ویروسهای تحت تیپ 9H ‌آنفلوآنزای طیور

‌تعداد 22 نمونه بافتی از ‌ گله‌های طیور مبتلا به بیماری‌های تنفسی ارجاعی به آزمایشگاه ویروس شناسی بخش طیور دانشکده دامپزشکی طی سال‌های 85-1383 گرفته شده و به منظور جداسازی ویروس آنفلوانزا ی طیور بر طبق روش استاندارد به تخم‌مرغ‌های‌جنین‌دار 11-9 روزه تلقیح شدند. در آزمایش RT - PCR ‌روی نمونه‌ها قسمتی از ژن هماگلوتینین 9Hبا قطعه ای به طول bp435 با پرایمرهای اختصاصی تکثیر شد. نتایج نشان داد ک...

full text

طراحی و راه اندازی روش TaqMan Real-time PCR جهت تشخیص و تعیین کمی ویروس نقص ایمنی اکتسابی نوع1 (HIV-1)

Background: Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) is one of the most important blood-borne infectious viruses that are considered a global problem, thus it is important to diagnose it with high accuracy and sensitivity. Serologic methods do not adequately detect this infection. Therefore, the purpose of the present study was to design a sensitive method based on TaqMan Real-time PCR me...

full text

مقایسه حساسیت دو روش RT-PCR و RRT-PCR برای تشخیص ویروس بیماری نیوکاسل در طیور

زمینه مطالعه: بیماری نیوکاسل یکی از مخرب ترین بیماریهای ویروسی طیور در سرتاسر جهان است. هدف: با توجه به اینکه روش‌های سنتی قابلیت محدودی در کنترل این بیماری دارند، انجام این مطالعه به منظور استفاده از تکنولوژی‌های نوین برای تشخیص به موقع بیماری جهت کاهش خسارت پیش روی صنعت طیور می‌باشد. روش کار: استخراج RNA با استفاده از کیت RNease mini و بر اساس دستورالعمل شرکت سازنده انجام شد. RNA استخراج شده ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 3  issue 4

pages  309- 315

publication date 2007-01

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023