جداسازی و تخلیص پروتیین دخیل در سیستم نوری گونه فانوس ماهی(benthosema pterotum) و کلونینگ، بیان، و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی پروتئین نوترکیب
Abstract
برای اولین بار یک لوسیفراز جدید از گونه benthosema pterotum ،از بندر جاسک در نزدیکی خلیج فارس جمع آوری شد، توسط روش کروماتوگرافی تعویض یونی و با استفاده از رزین q- سفارز تخلیص شد. وزن ملکولی پروتئین با استفاده از روش sds- page در حدود kda 27 و مقدار km برابر با m? 4/0 بود، هر دو این مقادیر مشابه دیگر کولنترازین لوسیفرازها بود. آنزیم bp luciferase بیشینه نشر نور را در دمای co 40، بافر mm tris- hcl ph 9 20 و غلظت mm mg2+ 20 نشان می داد. اندازه گیری های تجربی نشان داد که bp luciferase یک آنزیم نسبتا" پایدار به حرارت بوده و در ph های بحرانی فعالیت باقی مانده بالایی داشت. فعالیت آنزیم به شدت در غلظت mm 1 از یون های cu2+، zn2+ و ni2+ مهار می شد در حالی که کلسیم و به ویژه منیزیم به شدت فعالیت آنزیم را افزایش می دادند. همانند سایر کولنترازین لوسیفرازها، آنزیم bp luciferase نور آبی از خود نشر می کرد، ?max محاسبه شده برای آنزیم nm 475 بود. دیگر پارامترهای اندازه گیری شده برای این آنزیم متفاوت از سایر کولنترازین لوسیفرازهای شناخته شده بود که تایید می کرد پروتئین جدیدی خالص شده است. در این پژوهش همچنین cdna ژن آنزیم bp luciferase کلون و تعیین سکانس شد. cdna یک قطعه bp 666 بود که توانایی کد کردن پلی پپتیدی با 222 آمینواسید و وزن ملکولی در حدود kda 24 را داشت. ویژگی های لومینسانس پروتئین نوترکیب در مقایسه با آنزیم native کاهش یافته بود. به نظر می رسد پروتئین بیان شده بخشی از زیر واحد کاتالیتیک آنزیم bp luciferase باشد اما به دلیل این که کل ژن این آنزیم کلون نشده، بیان پروتئین کامل نیست. این امر می تواند دلیل فعالیت کمتر پروتئین نوترکیب در مقایسه با پروتئین native استخراج شده از بافت های فوتوژنیک باشد.