ViraScience.
Thesis

بررسی پایداری حرارتی آنزیم آلفا آمیلاز حاصل از باسیلوس 8104kr با استفاده از موتاسیون هدفمند

مهسا رحیم زاده

Abstract

برای استفاده کارآمد از آلفا- آمیلازها این آنزیم ها باید در دماهای بالا پایدار بوده و فعالیت خود را حفظ کنند. یکی از دلایل غیر فعال شدن حرارتی برگشت ناپذیر آنزیم ها، ایجاد تغییرات کووالان نظیر دآمیداسیون اسید آمینه های آسپارژین و گلوتامین می باشد. اسیدهای آمینه آسپارژین در دماهای بالا ممکن است دستخوش تغییر شیمیایی نظیر جدا شدن گروه آمین شوند. در این مطالعه آلفا- آمیلاز جدا شده از سویه ایرانی باسیلوس kr8104 که bka نامیده می شود مورد بررسی قرار گرفت. انتخاب اسیدهای آمینه آسپارژین به منظور ایجاد جهش با تمرکز بر ساختار کریستالی پروتئین انجام شد. با توجه به ساختار سه بعدی پروتئین 6 اسید آمینه آسپارژین که انتظار می رفت بطور بالقوه قابلیت دآمیده شدن داشته باشند انتخاب شده و بوسیله موتاسیون هدفمند به اسیدهای آمینه دارای بار مثبت، بار منفی و قطبی بدون بار تغییر یافتند. به این ترتیب 16 جهش یافته مختلف ایجاد شده و میزان پایداری حرارتی هر کدام پس از انکوبه کردن در دمای بالا مورد بررسی قرار گرفت. در مقایسه با آنزیم وحشی 4 آنزیم جهش یافته توانستند پایداری پروتئین را در دمای بالا افزایش دهند. بیشترین پایداری در مورد جایگزینی n112d مشاهده گردید که سبب افزایش نیمه عمر پروتئین به میزان 5 برابر در دمای c° 70 شده بود. همچنین جایگزینی های n112e، n129d و n312s نیز توانستند پایداری پروتئین را به طور قابل توجهی افزایش دهند. در مرحله بعد به منظور افزایش بیشتر پایداری پروتئین، 5 جهش یافته حاوی 2 جهش و یک موتانت دارای 3 جهش ساخته شده و پایداری حرارتی آنها مورد بررسی قرار گرفت. موتانت دارای دو جهش n112d/ n129d بیشترین میزان پایداری را داشته و نیمه عمر این آنزیم در مقایسه با آنزیم وحشی حدود 9 برابر افزایش یافت. علاوه بر نیمه عمر پروتئین ها دیگر پارامترهای مرتبط با پایداری نظیر t50 و tm نیز اندازه گیری شدند. نتایج نشان دادند که جایگزینی های انجام شده اثرات مطلوبی در بهبود پایداری حرارتی آنزیم bka ایجاد کرده اند.

Supervisors and advisors

خسرو خواجه، منوچهر میرشاهی، محمود خیاطیان

Similar items

  • جداسازی یک سویه بومی باسیلوس لیکنی فورمیس تولید کننده آنزیم آلفا آمیلاز از منابع گرم استان سمنان

    Article2009فصلنامه علمی پژوهشی دنیای میکروب هامجید مقبلی، حمید نوشیری

    مقدمه و هدف: آمیلاز یکی از آنزیم های صنعتی مهم می باشد که در صنایع غذایی، تولید شوینده ها، تولید گلوکز، نساجی و کاغذ سازی کاربرد دارد. باسیلوس ها، از مهم ترین میکروارگانیسم های تولید کننده آمیلاز و پروتئاز می باشند. هدف از این پژوهش جداسازی باسیلوس گرمادوست مولد آنزیم آلفا- آمیلا

  • جداسازی یک سویه بومی باسیلوس لیکنی‌فورمیس تولید کننده آنزیم آلفا آمیلاز از منابع گرم استان سمنان

    Article2009دنیای میکروب هاحمید نوشیری، مجید مقبلی

    مقدمه و هدف: آمیلاز یکی از آنزیم‌های صنعتی مهم می‌باشد که در صنایع غذایی، تولید شوینده ها، تولید گلوکز، نساجی و کاغذ‌سازی کاربرد دارد. باسیلوس ‌ها، از مهم‌ترین میکروارگانیسم‌های تولید کننده آمیلاز و پروتئاز می‌باشند. هدف از این پژوهش جداسازی باسیلوس گرمادوست مولد آنزیم آلفا- آمیل

  • جداسازی یک سویه بومی باسیلوس لیکنی‌فورمیس تولید کننده آنزیم آلفا آمیلاز از منابع گرم استان سمنان

    Article2009دنیای میکروب هاحمید نوشیری، مجید مقبلی

    مقدمه و هدف: آمیلاز یکی از آنزیم‌های صنعتی مهم می‌باشد که در صنایع غذایی، تولید شوینده ها، تولید گلوکز، نساجی و کاغذ‌سازی کاربرد دارد. باسیلوس ‌ها، از مهم‌ترین میکروارگانیسم‌های تولید کننده آمیلاز و پروتئاز می‌باشند. هدف از این پژوهش جداسازی باسیلوس گرمادوست مولد آنزیم آلفا- آمیل

  • بررسی پروفیل آنزیمی باکتری باسیلوس آمیلولیکوئیفاسینس BEH 111 و تعیین ویژگی‌های آنزیم آلفا-آمیلاز تولید شده بوسیله این باکتری

    Article2012مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیالهام آریاپور، پروین شریعتی، فاطمه تابنده، باقر یخچالی

    سابقه و هدف. آمیلازها، یکی از آنزیم های عمده صنعتی هستند که حدود 25% از بازار جهانی آنزیم ها را به خود اختصاص می دهند. این آنزیم ها در صنایع مختلف مثل نساجی، کاغذ سازی، داروسازی و صنایع غذایی مانند شیرین سازی و فرآوری نشاسته، استفاده می شوند. تحقیقات بسیاری در ارتباط با کاربرد آن

  • تولید و ارزیابی مشخصات آنزیم آلفا آمیلاز گرمادوست و نمک دوست جدا شده از باکتری آنوکسی باسیلوس جونیسیس AT23

    Article2017دنیای میکروب هاارسطو بدویی دلفارد، زهرا کرمی، سعیده افریشم، عبدالحمید نمکی شوشتری

    سابقه و هدف: آلفا آمیلازهای گرمادوست کاربردهای بسیار زیادی در صنایع مختلف دارند. از این میان می توان به فرآوری نشاسته و تولید شوینده ها اشاره نمود. این مطالعه با هدف جداسازی باکتری های مولد آلفا آمیلاز گرمادوست و نیز تعیین خصوصیت آن ها انجام شد. مواد و روش ها: پس از نمونه برداری

  • بررسی پروفیل آنزیمی باکتری باسیلوس آمیلولیکوئیفاسینس beh ۱۱۱ و تعیین ویژگی های آنزیم آلفا-آمیلاز تولید شده بوسیله این باکتری

    Articleمجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیالهام آریاپور، elham aryapour department of microbiology, islamic azad university, falavarjan branch, isfahan- iranگروه میکروبیولوژی ،دانشگاه آزاد اسلامی واحد فلاورجان، اصفهان ،ایران پروین شریعتی، parvin shariati department of industrial and environmental biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), tehran- iran.گروه زیست فناوری صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری (nigeb) ، تهران،ایران فاطمه تابنده، fatemeh tabandeh department of industrial and environmental biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), tehran- iran.گروه زیست فناوری صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری (nigeb) ، تهران،ایران باقر یخچالی

    سابقه و هدف. آمیلازها، یکی از آنزیم های عمده صنعتی هستند که حدود 25% از بازار جهانی آنزیم ها را به خود اختصاص می دهند. این آنزیم ها در صنایع مختلف مثل نساجی، کاغذ سازی، داروسازی و صنایع غذایی مانند شیرین سازی و فرآوری نشاسته، استفاده می شوند. تحقیقات بسیاری در ارتباط با کاربرد آن