بیان زیر واحد S100A8 نوترکیب و اثر کلسیم بر ساختار سوم آن

  زمینه: S100A8 به عنوان یکی از زیر واحدهای سازنده هترودایمر کالپروتکتین در بسیاری از فرآیندهای وابسته به التهاب و سرطان ایفای نقش می­کند.   هدف: مطالعه به منظور تولید S100A8 به صورت نوترکیب و تعیین اثر کلسیم بر ساختار سوم آن انجام شد.   مواد و روش­ها: این مطالعه تجربی در سال 1392 در دانشگاه علوم پزشکی قزوین انجام شد. ابتدا زیر واحد S100A8 در پلاسمید pET15b نوترکیب و میزبان E. Coli BL21 (DE3) به صورت پروتئین دارای his-tag بیان شد. فرآیند تخلیص پروتئین در دو حالت محلول و نامحلول، با استفاده از ستون نیکل و غلظت­های مختلف ایمیدازول انجام شد. بیان و خلوص پروتئین نوترکیب از طریق الکتروفورز SDS-PAGE ارزیابی شد. ساختار سوم S100A8 با استفاده از روش طیف سنجی فلورسانس، در حضور و عدم حضور کلسیم بررسی گردید.   یافته­ها: در حالت نامحلول بیش­ترین پروتئین S100A8 با وزن مولکولی 8 کیلودالتون بیان شد. در فرآیند تخلیص، خالص­ترین پروتئین محلول با استفاده از غلظت­های 150 و 200 میلی­مولار ایمیدازول به دست آمد. در طول موج 330 نانومتر، بیش­ترین میزان نشر فلورسانس S100A8 در حضور و عدم حضور کلسیم مشاهده شد و شدت نشر در حضور غلظت­های مختلف کلسیم کاهش یافت.   نتیجه­گیری: تغییر ساختار سوم زیرواحد S100A8 در حضور کلسیم، ممکن است عملکرد پروتئین را تحت تأثیر قرار داده و به درک نقش این پروتئین در فرآیندهای التهابی و سرطان کمک نماید.