توسعه روش NASBA-ELISA برای تشخیص HIV-1 RNA

  چکید ه   سابقه و هدف   با شروع عفونت HIV-1 ، اولین مارکری که در خون آشکار می‌شود، RNA ویروسی می‌باشد. از میان روش‌های موجود که شناسایی RNA را هدف قرار می‌دهند؛ متداول‌ترین روش‌ها NASBA و RT-PCR هستند. NASBA مزیت‌های متعددی نسبت به RT-PCR ارایه می‌کند. در این پژوهش، واکنش NASBA در ترکیب با روش آشکارسازی آسان و حساس الایزا، برای تشخیص و آشکارسازی HIV-1 RNA مورد استفاده قرار گرفت.   مواد و روش‌ها   نوع مطالعه انجام شده از نوع بنیادی ـ کاربردی بود. با وارد کردن نوکلئوتید 11-dig-UTP در مخلوط واکنش NASBA ، RNA نشاندار تولید شد. آن‌گاه محصولات نشاندار NASBA در فاز مایع به یک پروب اختصاصی متصل به بیوتین هیبرید شدند. سپس هیبریدهای حاصل به یک پلیت پوشیده شده با استرپتواویدین منتقل شده، پس از اعمال شستشوها و خارج کردن محصولات غیر اختصاصی از محیط واکنش، آشکارسازی نهایی با اضافه کردن کونژوگه آنتی دیگوکسی ژنین ـ آنزیم و سوبسترای آن صورت گرفت.   یافته‌ها   نتایج به دست آمده نشانگر کارآیی واکنش NASBA در تکثیر ناحیه مورد نظر از ژنوم ویروس بود و آشکارسازی محصولات NASBA بر روی ژل آگاروز منحصراً یک باند 176 نوکلئوتیدی مربوط به هدف را نشان می‌داد. با به کارگیری روش الایزا در آشکارسازی محصولات NASBA ، برای غلظت 01/0 مایکرو مولار پروب، OD برابر با 11/0 ± 049/1 به دست آمد.   نتیجه گیری   در این مطالعه با به کارگیری آغازگر و پروب مناسب، روش تشخیصی NASBA-ELISA با حساسیت و اختصاصیت بالا برای HIV-1 راه‌اندازی شد.