کلونینگ مولکولی بخشی از تیوردوکسین ردوکتاز در گوسفند

تیوردوکسین ردوکتاز آنزیمی با عملکرد های متعدد از قبیل شرکت در واکنش های احیا کننده، سنتز پروتئین، سنتز dna، تنظیم عملکرد فاکتورهای رونوشت برداری، تنظیم آپوپتوزیس، و تنظیم فعالیت سیستم ایمنی می باشد . تیوردوکسین ردوکتاز در گونه های متعددی تعیین توالی شده است. توالی ژن تیوردوکسین ردوکتاز در گوسفند مشخص نیست و گزارشی در این مورد وجود ندارد. نقش این آنزیم نیز در گوسفند نامشخص است. در این بررسی تلاش شد تا توالی این ژن را در گوسفند تعیین کنیم. جهت تعیین توالی ژن تیوردوکسین ردوکتاز در گوسفند نسبت به کلونینگ این ژن در گوسفند اقدام شد. جهت کلونینگ مولکولی ژن تیوردوکسین ردوکتاز در مدل گوسفندی، استخراج rna از بافت های کبد و تیروئید انجام گرفت و پس از rt با پرایمر ها ی الیگوdt و پرایمرهای تصادفی شش تایی، توسط پرایمر های اولیه و ثانویه pcr انجام شد. جهت اطمینان از صحت کارایی معرف های مورد استفاده در واکنش pcr از پرایمر اکتین سیتوپلاسمی به عنوان کنترل داخلی استفاده شد. دراین مطالعه یک باند 379 جفت بازی از nested pcr نمونه های تیروئید گوسفند بدست آمد. از وکتور pgata استفاده و با موفقیت ساب کلونینگ انجام شد. قطعه کلون شده حاصل جهت تعیین توالی ارسال شد. سکانس به دست آمده از این قطعه انجام تکنیک race در دو انتهای rna و تعیین سکانس کامل تایوردوکسین ردوکتاز گوسفند را امکانپذیر می سازد.