کلونینگ و بیان مناطق بالقوه آنتی ژنیک و اختصاصی پروتئین 3-3-14 فاسیولا ژیگانتیکا

فاسیولا ژیگانتیکا ترماتود معمول کبدی است که می تواند طیف وسیعی از میزبان های مهره دار را آلوده کند. اغلب در نشخوارکنندگان اهلی مانند گاو، بز و گوسفند یافت شده است. عفونت فاسیولا ژیگانتیکا باعث ایجاد خسارات اقتصادی در سراسر جهان می شود. تشخیص عفونت های فاسیولا بر پایه آزمایش مدفوع و شمارش تخم یا آزمایش های سرولوژیکی که بعضی از آنها بر مبنی شناسایی آنتی ژن است صورت می گیرد. در صورت جستجوی برخی ازآنتی ژن های خاص انگل تشخیص زود هنگام بیماری امکان پذیر می گردد. پروتئین 3-3-14 فاسیولا به عنوان یکی از آنتی ژنهای تشخیصی برای استفاده در آزمایشات تشخیصی و مطالعات مرتبط با واکسن می باشد. هدف از این تحقیق کلون کردن ژن 3-3- 14انگل فاسیولا ژیگانتیکا در وکتور pmal-c2x و بررسی بیان آن در اشرشیا کلی سویهtg1 بود. بدین منظور ابتدا توالی نوکلئوتیدی 3-3-14 فاسیولا ژیگانتیکا از منابع اطلاعاتی بانک ژن استخراج و مورد بررسی قرار گرفت تا پرایمرهای مناسب برای تکثیر این ژن در آزمایش rt-pcr طراحی گردد. سپس با استفاده از پرایمرهای طراحی شده ژن 14-3-3 با روشrt-pcr تکثیر گشت. عمل برش وکتور و ژن مورد نظر توسط آنزیم های تعیین حدود bamh i و hiniii و ecori و sali الحاق آنها به همدیگر با استفاده از آنزیم t4 لیگاز صورت گرفت. این ساختار سرانجام به باکتری e. coli سویه tgi منتقل شد و بیان پروتئین 3-3-14 با استفاده از روش -page sds بررسی گردید. نتایج حاصل از این تحقیق نشان می دهد که پلاسمید نوترکیب تهیه شده به خوبی موجب بیان این ژن می شود .