بررسی اثرات سمیت سلولی و ضد سرطانی ترکیب diversin بر روی سلول های tcc رده 5637 در شرایط in vitro و ارزیابی توانایی این ترکیب در القای آپوپتوز

سرطان مثانه رشد غیر طبیعی و خارج از کنترل سلول های مثانه است که خارج از مکانیسم های معمول کنترل بدن اتفاق می افتد. سرطان مثانه رایج ترین تومور سیستم ادراری می باشد. استفاده از شیمی درمانی یکی از راهکار های اصلی برای کاهش دادن سرعت پیشرفت سرطان و یا درمان آن می باشد. تعــداد زیادی از فاکتور های شیمی درمانی به عنوان عوامل دارای سمیت سلولی طبقه بندی می شوند که دارای اثرات مشابه بر روی سلول های نرمال و نئوپلاستیک می باشند. امروزه اکثر محققان در زمینه شیمی درمانی سرطان ترجیح می دهند از ترکیباتی استفاده کنند که در غلظت های مورد استفاده، اثرات منفی بر روی سلول های نرمال نداشته باشند. در این مطالعه اثرات ضد سرطانی diversin، ترکیب طبیعی بر پایه کومارین، که از ferula diversivittata جداسازی شده است، بر روی سلول های tcc زیر رده 5637، بررسی شد. در این مطالعه همچنین سمیت سلولی نسبی diversin و دو کومارین ساده دیگر به نام های umbelliferone و herniarin مورد بررسی قرار گرفت. غلظت های مختلف از diversin (10، 20، 30، 40، 50، 60، 70، 80، 90 و µg/ml 100) تهیه شده و به سلول های tcc کشت شده در ظرف های 96 خانه ای اضافه شدند. مقادیر مساوی از dmso به عنوان کنترل مورد استفاده قرار گرفتند. مراحل مشابه بر روی سلول های hdf1 و hff3، دو رده سلولی نرمال انسانی انجام شد. 24، 48 و 72 ساعت پس از تیمار سلول ها، سمیت سلولی diversin با استفاده از روش mtt ارزیابی شد و مقادیر ic50 محاسبه شدند. همچنین سطح chromatin condensation و dna damage که به وسیله تیمار با diversin در سلول های tcc القاء می شود، به ترتیب با استفاده از روش رنگ آمیزی dapi و comet assay بررسی شد. مکانیسم دقیق تر عملکرد diversin با استفاده از روش caspase 3 colorimetric assay kit تعیین گردید. نتـایج نشـان داد که herniarin و umbelliferone فاقد اثرات سمیت سلولی بر روی ســلول های tcc می باشند؛ اما herniarin می تواند سمیت سلولی سیس پلاتین بر روی این سلول ها را تا 20% افزایش دهد. در این پژوهش ic50 ترکیب diversin بر روی سلول های tcc و hff3 پس از تیمار 48 ساعته به ترتیب برابر با µg/ml 70 و µg/ml 90 و 72 ساعت پس از تیمار به ترتیب برابر با µg/ml 40 و µg/ml 80 تعیین گردید. همچنین نشان داده شد که diversin توانایی القای chromatin condensation و آسیب dna که از ویژگی های شناخته شده آپوپتوز هستند را در سلول های tcc دارد. ارزیابی سطح فعالیت کاسپاز 3 در سلول های تیمار شده با diversin و مقایسه نتایج آن با کنترل های مثبت و منفی و تیمار نشده، به راه افتادن مسیر های آپوپتوزی را به وسیله diversin تأیید نمود. بررسی نتایج نشان داد که diversin می تواند به عنوان یک فاکتور ضد سرطان مستعد معرفی شود. بررسی روابط ساختار با فعالیت نشان داد که گروه پرنیل سمیت سلولی هسته کومارین را در مقایسه با گروه هیدروکسیل در umbelliferone و متوکسی در herniarin افزایش می دهد. مطالعات بیشتر به منظور بررسی اثر این ترکیب بر روی سایر رده های سلولی سرطانی و نرمال و نیز تعیین مکانیسم دقیق آپوپتوز که پس از تیمار با این ترکیب القاء می شود، ضروری می نماید.