کلونینگ و بیان قطعات pomp90-3، pomp90-4 و pomp90-3,4 از ژن pomp90 کلامیدوفیلا ابورتوس سویه 3/26 در اشریشیا کولی

بیماری سقط آنزئوتیک میش ها که توسط کلامیدوفیلا ابورتوس ایجاد می شود، به عنوان یکی از رایج ترین بیماری های کلامیدیایی در حیوانات ضررهای اقتصادی فراوانی را متوجه صنعت دامپروری ساخته است. کلامیدوفیلا ابورتوس (کلامیدوفیلا پسی تاسی، سروتیپ 1) یک باکتری گرم منفی داخل سلولی می باشد که اخیرا در جنس کلامیدوفیلا از خانواده کلامیدیاسه طبقه بندی شده است و علاوه بر خسارات اقتصادی در دامپزشکی، یک خطر زئونوز برای زنان باردار محسوب می شود. اگر چه مشاهده مستقیم پاتوژن یک روش تشخیصی اصلی می باشد، اما روش های سرولوژیکی برای غربالگری تعداد زیاد دام ها مناسب تر می باشند. روش های متعددی به منظور ارزیابی سرولوژیکی کلامیدیایی گسترش یافته اند، که اختصاصی ترین آنها بر پایه پروتئین های پلی مورفیک غشای خارجی (pomp90) می باشد. هدف از این مطالعه تولید سه قطعه پروتئین نوترکیب از پروتئینpomp90 و طراحی الیزا توسط آن ها بود. به این منظور نواحی ژنی کد کننده قطعات مورد نظر ازdna ژنومی باکتری کلامیدوفیلا ابورتوس سویه ی 3/26 با pcr تکثیر و با استفاده از وکتور بیانی- پروکاریوتی pgex-4t-1 در باکتری اشریشیا کولی سویه ی bl21 کلون گردید. پروتئین های نوترکیب بیان شده در اشریشیا کولی با کمک ستون کروماتوگرافی گلوتاتیون آگارز خالص و به عنوان آنتی ژن های تشخیصی در طراحی الیزای غیر مستقیم اختصاصی گونه، برای بررسی آنتی بادی های تولید شده بر ضد باکتری کلامیدوفیلا ابورتوس در گوسفند مورد استفاده قرار گرفت. الیزاهای طراحی شده با هر سه قطعه، با یکدیگر و با کیت تجاری کلامیدوفیلا ابورتوس نشخوارکنندگان ساخت institute pourquier مقایسه شدند. بهترین توافق (91/92%) بین الیزای طراحی شده با قطعه ی 3 و کیت تجاری مشاهده شد (858/0=k). بنابراین الیزای طراحی شده با قطعه ی 3 برای تشخیص آنتی-بادی در سرم میش های آلوده به کلامیدوفیلا ابورتوس، مشابه کیت تجاری عمل می کند و نشان دادن تعداد کمتری از موارد مثبت با الیزای طراحی شده می تواند ناشی از بالاتر بودن ویژگی آن باشد، نه پایین تر بودن حساسیت آن.