ارزیابی تاثیر عوامل تراتوژن بر بیان ایزوآنزیم p4501a1 در کشت سلولهای جوانه اندام حرکتی

cyp1a1، یک ایزوآنزیم p450 درگیر در متابولیسم فاز ? زینوبیوتیک ها از قبیل داروهای تراتوژن است. این آنزیم علاوه بر کبد در سلول های جوانه اندام حرکتی و مغز میانی بیان می شود. هدف این مطالعه ارزیابی نقش cyp1a1 به عنوان یک مارکر تراتوژنز با استفاده از کشت میکرومس جوانه اندام حرکتی جنین رت است. رت های ویستار آلبینو (g300-250) در طول شب جفتگیری کرده و صبح روز بعد وجود واژینال اسمیر به عنوان نشانه بارداری در نظرگرفته می شود. با تزریق درون صفاقی بتا-نفتوفلاون (mg/kg35) در روزهای 12-10 بارداری، cyp1a1 القا می شود. سلولهای جوانه اندام حرکتی از جنین رت سیزده روزه حاصل شده و در انکوباتور co2 در دمای c°37 نگهداری می شوند. در روز دوم کشت، سلول ها با غلظت های مختلف اسید رتینوئیک، هیدروکورتیزون، کافئین و کینین به مدت چهار روز مواجه می شوند. در روز هشتم کشت سلولی سمیت سلولی و تمایز سلولی به ترتیب با رنگ آمیزی نوترال رد و آلسیان بلو ارزیابی می شوند. دوزهای رتینوئیک اسید، هیدروکورتیزون، کافئین و کینین برای ارزیابی های بیان پروتئین و فعالیت آنزیمی آنزیم cyp1a1براساس حیات سلولی بیش از 95% انتخاب می شوند. بیان پروتئین و فعالیت آنزیمی آنزیم cyp1a1 به ترتیب با رنگ آمیزی ایمنوفلورسنس و واکنش 7–اتوکسی رزوروفین–o-داتیلاز (erod) سنجیده می شود. فعالیت erod آنزیم cyp1a1 به دنبال مواجه با اسید رتینوئیک بصورت وابسته به دوز و هیدروکورتیزون در بالاترین دوز بطور قابل توجهی افزایش می دهد. اما بیان پروتئین تحت درمان با این دو دارو کاهش داده می شود در حالیکه مواجه با کافئین وکینین، بیان پروتئین و فعالیتerod آنزیم cyp1a1 را بطور قابل توجهی کاهش می دهد. نتایج این مطالعه اثرات تراتوژنیک اسید رتینوئیک، هیدروکورتیزون و غیرتراتوژنیک کافئین و کینین را براساس نسبت بقا/تمایز?1 تایید کرد. علاوه بر این، یافته هاcyp1a1 را به عنوان یک مارکر احتمالی تراتوژنیسیته معرفی می کند که می تواند برای تشخیص عوامل تراتوژنیک مهم باشد.