تعیین سیستم تظاهر ژن دفنزین جهت افزایش ایمنی گیاه لوبیا بر اساس بیان گذرا

چکیده بیان موقت برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و به عنوان ابزاری برای آگاهی سریع از نتیجه انتقال ژن، استفاده می شود. بیان موقت از طریق تزریق سوسپانسیون اگروباکتریوم به داخل اندام های گیاه (اگرواینفیلتریشن) روشی بسیار سریع و موثر برای آنالیز گیاهان تراریخت است که به تجهیزات گران قیمت نیاز ندارد. مطالعه حاضر به منظور تظاهر ژن sd2mod تحت کنترل عناصر تنظیم کننده مختلف از طریق بیان موقت در گیاه لوبیا و مقایسه سه سیستم تظاهری جهت انتخاب بهترین سیستم برای انتقال ژن به گیاه لوبیا انجام شده است. برای این منظور سه ترکیب پلاسمیدی بعد از تکثیر، به اگروباکتریوم منتقل شدند و سپس با تهیه سوسپانسیونی از اگروباکتریوم و تزریق به سطح زیرین پهنک برگ، پروتئین برگ های تزریق شده سه روز بعد از تزریق استخراج شد. برای هر ترکیب پلاسمیدی 30 برگ تزریق گردید و بعد از استخراج پروتئین میزان پروتئین کل و پروتئین نوترکیب اندازه گیری گردید. نتایج نشان داد که میزان پروتئین در ترکیب پلاسمیدی شماره 1 که باعث تجمع پروتئین در شبکه آندوپلاسمی می گردد بیشترین مقدار است که دلیل آن عدم وجود پروتئازها در شبکه آندوپلاسمی است که باعث می شود پروتئین هضم نشود. ترکیبات پلاسمیدی شماره 2 و 3 به دلیل مدت زمان کوتاه تظاهر ژن (72 ساعت) اختلاف معنی داری نشان ندادند که در صورت زمان طولانی تر برای تظاهر، امکان اختلاف وجود داشت. این نتایج در اندازه گیری پروتئین نوترکیب که با بررسی فعالیت ژن گزارشگر licbm2 انجام شد نیز به همین صورت به دست آمد. نتایج حاصل از همبستگی بین میزان پروتئین کل و میزان پروتئین نوترکیب همبستگی مثبت و بالایی نشان داد. از این رو می توان صرفاً با اندازه گیری میزان پروتئین کل به فعالیت بهتر سیستم پی برد که در وقت و هزینه صرفه جویی می شود. علاوه بر آن، بررسی کارایی اگرواینفیلتریشن در گیاه لوبیا قرمز ناز نشان داد که روش استفاده شده در این تحقیق مناسب بوده است و کارایی تراریختی نسبتاً خوبی به دست آمد. همچنین اثر مثبت استوسیرینگون در کارایی تراریختی به خوبی اثبات گشت زیرا کارایی تراریختی در فقدان استوسیرینگون بسیار پایین بود. کلمات کلیدی: بیان موقت، اگرواینفیلتریشن، پروتئین نوترکیب، لوبیا، licbm2