تهیه ی کانژوگه پراکسیداز آنتی بادی مونوکلونال ضد igg مرغ و ارزیابی آن به وسیله الیزا

میکروارگانیسم های بیماری زا از عوامل اصلی تلفات و خسارت های اقتصادی در صنعت طیور هستند. به دلیل تأثیر این عوامل بر صنعت طیور کیت های آزمایشگاهی مختلفی بر پایه الیزا برای تشخیص عفونت های حاصل از این عوامل طراحی شده اند. در این کیت ها اغلب از یک آنتی بادی ثانویه ی کانژوگه شده با آنزیم به منظور شناسایی igg مرغ استفاده می شود. هدف از مطالعه ی حاضر نشان دار کردن یک آنتی بادی مونوکلونال ضد igg مرغ با آنزیم پراکسیداز و ارزیابی آن در الیزای غیر مستقیم به عنوان آنتی بادی ثانویه می باشد. برای این منظور یک تیره سلول هیبریدومای تولید کننده ی آنتی بادی مونوکلونال (5b8) ضد igg مرغ در محیط rpmi 1640 کشت داده شده و مایع روی سلول ها جهت خالص سازی آنتی بادی 5b8 جمع آوری گردید. خالص سازی این آنتی-بادی از محیط کشت با استفاده از یک ستون حاوی سفارز حساس شده با igg مرغ انجام شد. برای آماده کردن این ستون ابتدا igg مرغ با استفاده از اسیدکاپریلیک و سولفات آمونیوم خالص سازی و نتیجه خالص سازی با استفاده از sds- page بررسی شد. سپس طبق روش های استاندارد igg خالص شده مرغ به رزین سفارز فعال شده با سیانور بروهیدرید اتصال داده شد. پس از خالص سازی آنتی بادی 5b8 با ستون سفارز، واکنش آنتی بادی خالص شده با igg مرغ در الیزای غیرمستقیم بررسی شد. براساس نتایج به دست آمده آنتی بادی مونوکلونال خالص شده تا رقت 204800/1 قادر به شناسایی igg مرغ با غلظت یک میکروگرم در حفره بود. پس از اطمینان از عملکرد آنتی بادی و نیز بررسی عاری بودن آن از آلودگی با igg مرغ (با آزمایش ایمونودات) واکنش کانژوگاسیون با آنزیم پراکسیدار به وسیله پریودات سدیم انجام گردید. عملکرد کانژوگه تهیه شده برای شناسایی igg مرغ در الیزای مستقیم مورد آزمایش قرار گرفت. نتایج نشان داد که کانژوگه تهیه شده تا رقت 32000/1 قادر به شناسایی igg مرغ با غلظت یک میکروگرم درحفره بود. در نهایت، توانایی کانژوگه ی پراکسیداز تجاری و تهیه شده برای شناسایی آنتی بادی های ضد نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوآنزا در سرم مرغ های آلوده به ویروس آنفلوآنزا بررسی شد. od بدست آمده از آزمایش انتهایی همبستگی قوی و معناداری (r =0.95 ,p<0.001) را بین کانژوگه ی تجاری و تهیه شده نشان داد. در نتیجه از کانژوگه ی تهیه شده می توان برای طراحی کیت های تشخیصی سرم شناسی طیور استفاده نمود.