بررسی عصاره فلاونوئیدی گیاه زنیان به روی بیان ژن سایتوکنین

گیاه زنیان l. trachyspermum copticumدر طب سنتی ایران به عنوان یک تسکین دهنده کاربرد داشته و خاصیت ضد التهابی آن به طور تجربی ثابت شده است. برای اثبات علمی این موضوع از عصاره الکلی بذر این گیاه به روی کشت های سلولی ،از سلولهای کندروسیت به عنوان مدلی شبیه سلولهای غضروف و از سلولهای مونوسیت/ماکروفاژ مبتلا به استئوآرتریت استفاده شد .1)در این روش دانه گیاه زنیان توسط مرکز ذخائر ژنتیکی و زیستی ایران تهیه و عصاره الکلی آن توسط متخصصین این مرکز در اردیبهشت ماه 92 فراهم شد. 2)سلولهای کندروسیت از بافت غضروفی مفصل متاکارپ اندام حرکتی جلویی گوساله هولشتاین 18 ماهه ، کاملا سالم و بدون مشاهده اثر التهاب، خونریزی و عفونت ناشی از استئوآرتریت، نمونه برداری شد. 3)مونوسیت ها به صورت فلاسکی حاوی یک میلیون سلول و 60 میلی لیتر محیط کشت غنی شده سلولی از انستیتوپاستور تهیه شد. سلولها در انکوباتور co2 دار در دمای 37 درجه کشت و جمعیت آنها تکثیر شد.سپس سلولها توسط هموسایتومتر شمارش و قدرت زنده مانی با روش تریپان بلو ارزیابی شد.پس از تکثیر سلولی، غلظت های متفاوت از عصاره گیاه تزریق و میزان lc50 تعیین شد. با تزریق lpsبه میزان ng/ml20به نمونه های تعیین شده در غلظت مناسب که لیز درآنها صورت نگرفته، به مدت یک ساعت در انکوباتور co2 دار ، التهاب ایجاد شد.سپس نمونه ها جهت جداسازیrna طبق دستور العمل کیت سیناژن آماده شد. rnaجدا شده در روش rtpcr بهcdna تبدیل شد وبه روش pcrمقدار cdnaافزایش یافت و با استفاده از آغازگر(پرایمر)های اختصاصی سایتوکنین ها ، میزان بیان ژن از طریق real time بررسی شد.