نام پژوهشگر: احمدفرهاد طالبی

مهندسی ژنتیک جلبک به منظور افزایش تولید چربی و بهبود عملکرد تولید بیودیزل
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی 1393
  احمدفرهاد طالبی   مسعود توحیدفر

جلبک به عنوان نسل سوم تولید کننده سوخت های زیستی علی الخصوص بیودیزل تمام پیش شرط های لازم به منظور تبدیل شدن به منبع پایدار تولید سوخت زیستی، از جمله توانایی رقابت با سوخت های فسیلی در زمینه هزینه تولید ، عدم نیاز به زمین کشاورزی مستعد، مصرف آب محدود و توانایی بالای ترسیب co2 اتمسفر را دارا است. در این تحقیق نخست از بین 11 گونه مختلف ریزجلبک انواع پربازده شناسایی شدند و معین شد که عملکرد تولید روغن، که خود مستقیماً از عملکرد تولید زیست توده تأثیر می پذیرد، خصوصیت مناسبی برای انتخاب و شناسایی گونه های پربازده می باشد. همچنین انواع تیمارهای بیوشیمیایی به منظور افزایش عملکرد تولید چربی بر روی گونه های موردنظر مطالعه شد. اعمال 200 میلی گرم در لیتر میواینوزیتول 50 درصد محتوی روغن سلولی را در گونه dunaliella salina افزایش داد اما از آنجائی که روش های معمول مثل کنترل شرایط رشد (دما، ph و شوری) و تأمین مواد غذایی در محیط رشد جلبک کارایی لازم برای افزایش تولید چربی در بیومس را ندارند، دستکاری¬ ژنتیکی آنزیم¬های کلیدی در سنتز اسیدهای چرب و افزایش بیان آن ها از طریق مهندسی کلروپلاست و هسته در دستور کار قرار گرفت. از جمله این ژن ها می توان me و accd را نام برد که در تحقیق حاضر بر روی سازه های ژنومی و کلروپلاستی ریزجلبک از جمله گونه d. salina، همسانه سازی شدند و نهایتاً ژن accd در ژنوم کلروپلاست این گونه با موفقیت الحاق شد. بیان موفق این ژن از راه اندازهای دائمی s16 اثرات محدودی بر روی میزان ونحوه تجمع چربی های سلولی در لاین های تراریخته را باعث شد اما بیان این تراژن خصوصیات کیفی بیودیزل تولیدی را بخوبی ارتقا داد. این نتیجه کارایی کاربرد رویکردهای ژنتیکی را در بهبود خصوصیات تولیدی روغن از منبع جلبک به تأیید رساند.

جداسازی، همسانه سازی و بیان ژن کنترل کننده پروتئین خارج غشایی omp 31 از منشأ brucella melitensis، مقدمه ای برای تولید واکسن بروسلوز
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده کشاورزی 1388
  احمدفرهاد طالبی   فاطمه واحدی

بروسلوز با بیش از نیم میلیون مورد گزارش سالانه بیماری، از شایع ترین بیماری های مشترک بین انسان و دام می باشد. در جهت ساخت واکسنی ایمن و بدون عوارض جانبی بر علیه این بیماری، کلونینگ ژن یکی از شاخص های مهم ایمنی زایی به نام omp31 در باکتری اشریشیا کلی به عنوان هدف این مطالعه در نظر گرفته شد. در این پژوهش پس از جداسازی و تکثیر قطعه ژنیomp31 از باکتری بروسلا ملی تنسیس سویه ی revi با استفاده از روش pcr، این ژن برای درج در ناقل بیانی pet32b(+) آماده گردید. سپس سازه ژنی pet32b(+)-omp31 به داخل باکتری اشریشیا کلی سویه bl21 وارد شد. برای تولید پروتئین از القا پلاسمید توسط iptg استفاده گردید. پروتئین نوترکیب توسط متیل افینیتی کروماتوگرافی ni-nta خالص گردیده و به روش براد فورد میزان آن تعیین گردید. ترادف نوکلئوتیدی ژن کلون شده در ناقل pet32b(+) با ژن omp31 بروسلا ملی تنسیس مطابق بود. پروتئین نوترکیب omp31 بصورت یک فیوژن پروتئین با وزن مولکولی 47 کیلو دالتون و با 6x his tag در دو انتها، عمدتاً در فاز نامحلول، بیان گردید. در شرایط بهینه برای تولید پروتئین، ، عملکردی در حدود 0/4 میکروگرم پروتئین خالص به ازای 20 میلی لیتر محیط کشت بدست آمد. پروتئین نوترکیب omp31 در باکتری اشریشیا کلی به صورت یک پروتئین فیوژن تولید و خالص گردیده و جهت مطالعات بیوشیمیایی و آنتی ژنیک بعدی در اختیار است.