نام پژوهشگر: مریم موسیوند

آنالیز مولکولی تاثیر سورفکتین باکتری bacillus subtilis بر روی فیتو پلاسما عامل بیماری جاروی جادوگر لیمو ترش candidatus" phytoplasma aurantifolia"
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان 1388
  نجمه عسکری   غلامرضا صالحی جوزانی

لیمو ترش جزو میوه های گرمسیری و نیمه گرمسیری بوده و از محصولات مهم و اقتصادی استان های جنوبی کشور مانند هرمزگان، کرمان و فارس می باشد. بیماری جاروک لیموترش ناشی از candidatus "phytoplasma aurantifolia" از عوامل جدی و بسیار خطرناک لیمو ترش و دیگر مرکبات حساس در مناطق جنوبی ایران و کشور های حاشیه خلیج فارس می باشد. این بیماری محدود به آوند آبکش بوده و کنترل آن فوق العاده مشکل می باشد. تاکنون فقط روش هایی مثل اقدامات قرنطینه ای، استفاده از ارقام مقاوم یا متحمل، کنترل علف های هرز و کنترل ناقل یا ناقلین احتمالی در منابع آلوده، برای مدیریت بیماری توصیه شده است. سورفکتین یکی از مهمترین آنتی بیوتیک هایی می باشد که بوسیله باکتری گرم مثبت bacillus subtilis تولید می شود. این لیپوپپتید باکتریایی دارای خواص ضد قارچی، ضد باکتریایی، ضد ویروسی، و ضد مایکوپلاسمایی می باشد.در این بررسی پس از شناسایی و استخراج سورفکتین از سویه بومی با توان تولید بالای سورفکتین، اثر سورفکتین جهت کنترل جاروک لیمو ترش،مورد ارزیا بی قرار گرفت. بدین منظور میزان کمی تولید سورفکتین با 10سویه با استفاده از آنالیز hplc،مورد بررسی قرار گرفت و جدایه a28bبا میزان تولید 2/1گرم در لیتر،به عنوان جدایه برتر برای تولید سورفکتین انتخاب شد وپس از بهینه سازی پروتکل استخراج در حجم بالا،میزان 6/2گرم سورفکتین از حجم 4لیتر ،تولید شد.پس از آن نهال های آلوده به فیتوپلاسمای عامل جاروک با استفاده از غلظتهای متفاوت سورفکتین وتتراسایکلین تیمار شد ومیزان کمی فیتوپلاسما،در نهالهای آلوده قبل و زمانهای متفاوت بعد از کاربرد تیمار با استفاده از تکنیکreal-time pcr با استفاده از آغازگر های اختصاصی پروتئین غشائی فایتوپلاسمای همراه جاروک لیمو ترش ،تعیین شد. آنالیز نهایی داده ها توسط مقدار عددی سیکل آستانه (ct) و بر پایه آزمایش فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی نامتعادل صورت گرفت ونشان داد که از نظر اماری تفاوت معنی داری در سطح ا%بین غلظت های مختلف وجود دارد.همچنین تفاوت معنی دار در سطح 1% بین زمانهای مختلف دیده شد. مقایسه میانگین دو عامل زمان وغلظت با روش چند دامنه ای دانکن نشان داد که زمانهای 2ماه و3ماه پس ازکاربرد تیمارها،اختلاف معنی داربا زمان های دیگر دارد،همچنین تفاوت معنی دار بین غلظت های مختلف با شا هد وجود دارد این امر نشان د هنده این است که همه تیمارهای به کار برده شده، جمعیت فیتوپلاسما راکا هش داده است و در زمان های 2 ماه و3ماه پس از کاربردسورفکتین وتتراسایکلین، کا هش قابل توجهی در جمعیت فیتوپلاسما دیده شد.

بررسی تنوع ژنهای کدکننده ی آنزیم بتاگلوکاناز در سویه های بومی باسیلوس جدا شده از محصولات زراعی- باغی کشور
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه ارومیه - دانشکده علوم پایه 1392
  شعله ده پهلوان   مریم هاشمی

بتاگلوکانازها از اعضای خانواده گلیکوزید هیدرولازها بوده که هیدرولیز پیوند‏های گلیکوزیدی بتا 1و 4 را در بتاگلوکان‏ها کاتالیز می‏کنند. این گروه از آنزیم¬ها براساس شباهت توالی¬های اسید آمینه نواحی کاتالیتکی خود در 15 خانواده از 86 خانواده گلیکوزید هیدرولازها گروه بندی شده¬اند. در این پژوهش هدف، تعیین توالی ژن های کد کننده آنزیم بتاگلوکاناز و طبقه بندی سویه های مورد بررسی بر اساس نوع خانواده آنزیمی و تعیین شرایط بهینه کاتالیتیکی آنزیم های تولیدی به روش سطح پاسخ بود. در این بررسی 27 سویه از bacillus subtilis جدا شده از باغات و مزارع کشور بر اساس توانایی تولید آنزیم بتاگلوکاناز، غربال شده و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، ژن آنزیم بتاگلوکاناز تکثیر، تعیین توالی و در پایگاه اطلاعاتیncbi ثبت شد. آنالیز توالی¬های به دست آمده و رسم درخت فیلوژنی با استفاده از نرم¬افزار vector nti وmega.4 انجام شد. مقایسه توالی آمینواسیدی ژن¬های اندوبتا 1و4 گلوکاناز در جدایه¬های مورد بررسی نشان داد که تمام جدایه¬ها دارای ژن¬های مذکور بوده و به ترتیب در خانواده¬های گلیکوزید هیدرولازهای 5 و16 قرار می¬گیرند. همچنین جدایه¬های مورد مطالعه خانواده 5 گلیکوزید هیدرولازها براساس تنوع در توالی آمینواسیدی ژن اندو بتا1و4 گلوکاناز در 11 گروه طبقه بندی شدند. همچنین فعالیت آنزیمی، آنزیم¬های تولید شده توسط 30 سویه که فعالیت آنزیمی بهتری داشتند را در 3 تیمار دمایی 30،55 و70 درجه سانتی گراد و در ph 6/4 مورد بررسی قرار گرفت. بر اساس نتایج حاصله 8 سویه s7e ، t37a ، k2b، k36p88، h14h ، h14d ، d3d و b5d با توجه به دامنه فعالیت آنزیمی و تنوع گیاه میزبان، برای تعیین شرایط بهینه فعالیت بتاگلوکانازی به روش سطح پاسخ و با طرح مرکب مرکزی و با متغیرهای دما، ph و غلظت سوبسترا مورد مطالعه قرار گرفتند. با توجه به نتایج حاصل سویه های s7e، t37a، k36p88، h14h ، h14d ، d3d و b5d در ph اسیدی و نزدیک به خنثی و رنج دمای 35-65 درجه سانتی گراد اپتیمم فعالیت را داشتند.سویه k2b برخلاف سویه های فوق در ph قلیایی نیز فعالیت قابل قبولی را داشت. بیشترین اثر فعال کننده و بازدارنده فعالیت آنزیمی به ترتیب مربوط به منگنز و جیوه در غلظت 10 میلی مولار بود. بتاگلوکاناز¬های سویه های مورد بررسی در غلظت¬های مختلف سدیم کلرید کاهش شدید فعالیت آنزیمی را داشتند و حضور اتانول 5 درصد تأثیری زیادی بر فعالیت آنزیم¬ها نداشت.

معرفی بهترین سویه ی بومی bacillus subtilis تولید کننده سورفکتین جهت کنترل عامل بیمار جاروی جادوگر لیموترش
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زابل - دانشکده کشاورزی 1387
  متین محمدی پور   غلامرضا صالحی جوزانی

چکیده ندارد.