نام پژوهشگر: محمد حسن شیرازی

بررسی اثرigy خوراکی ایجاد شده بر علیه اوره آز c از helicobacter pylori در موش های مبتلا به زخم معده
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شاهد - دانشکده علوم پایه 1389
  زیبا ویس ملک شاهی   سیدلطیف موسوی گرگری

هلیکوباکتر پیلوری یک باکتری گرم منفی اسپیرال و میکروآئروفیل است که در لایه مخاطی معده انسان تکثیر یافته و ایجاد عفونت می نماید. عفونت ایجاد شده توسط این باکتری که با تخریب بافت پوششی معده همراه است، منجر به التهاب مزمن معده می گردد که می تواند سبب ایجاد زخم های معده و دوازدهه گردد. مشکلات ناشی از درمان با آنتی بیوتیک ها باعث شده است که محققین رویکردهای جدیدی برای درمان عفونت های ناشی از h.pylori به کار گیرند، که از جمله آنها درمان های اختصاصی با آنتی بادی ها می باشد. آنزیم اوره آز به عنوان یکی از مهمترین عوامل بیماری زا و آنتی ژنیک این باکتری، هدف مناسبی برای این منظور است. هدف از این مطالعه بررسی اثر igy خوراکی تولید شده بر علیه آنزیم urec از باکتری h.pylori برای درمان موش های مبتلا به زخم معده می باشد. در این تحقیق پس از انتقال سازواره نوترکیب به باکتری e.coli سویه bl21de3، پروتئین نوترکیب مورد نظر بیان شد. پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبیni-nta تخلیص و در نهایت پس از تزریق به مرغ نژاد لگ هورن سفید، igy تولید شده از زرده تخم مرغ با ترسیب به کمک پلی اتیلن گلیکول تخلیص شد و با سنجش الایزای غیر مستقیم مورد ارزیابی قرار گرفت. تعداد 109 باکتری در محیط bhi (lµ 400) سه بار بصورت یک روز در میان به معده موش های c57bl/6j تلقیح شد. به موش های شاهد، به همان میزان، محیط کشت مایع bhi تلقیح گردید .هشت هفته پس از آخرین تلقیح از موشها خونگیری و سرم آنها جدا شد و میزان آلودگی توسط elisa مورد ارزیابی قرار گرفت. شدت التهاب معده توسط تست پاتولوژیکی بررسی شد. موشهای آلوده به مدت 28 روز هر کدام توسط mg 60 از igy حل شده در lµ500 pbs به صورت خوراکی مورد تیمار قرار گرفتند. بررسی های sds-page نشان داد که پروتئین نوترکیب به خوبی بیان و تخلیص شده است. نتایج بدست آمده از الایزای غیرمستقیم نشان دهنده تیتر بالای آنتی بادی در سرم و زرده تخم مرغ ها می باشند. همچنین نتایج elisa نشان دهنده ایجاد آلودگی به میزان 53% توسط h.pylori در موشهای c57bl/6jبود. نتایج پاتولوژی وجود التهاب در معده موشهای آلوده را تائید کرد. کاهش چشمگیری در تیتر آنتی بادی موشهای آلوده و درمان شده با igy در مقایسه با موشهای آلوده و تیمار نشده، دیده شد. با توجه به نتایج این تحقیق تولید آنتی بادی های مرغی در مهار وکنترل التهاب و عفونت معده توسط هلیکوباکتر پیلوری موثر بوده و از آنجایی که تولید انبوه این نوع آنتی بادی آسان و اقتصادی می باشد، igy می تواند جایگزین مناسبی برای آنتی بیوتیک ها در درمان عفونت هلیکوباکتر پیلوری باشد.