نام پژوهشگر: ابولفضل گلستانی
فاطمه یوسفی خسرو خواجه
سویه bacillus sp. kr8104 آلفا-آمیلازی غیر وابسته به کلسیم تحت نام bka تولید و با کارایی بالا به محیط کشت خود ترشح میکند. کریستالوگرافی آنزیم خالصشده از محیط کشت پروتئینی با سه دمین عمومی آلفا-آمیلازها متشکل از 422 آمینو اسید را نشان میدهد. ژن این آنزیم پروتئینی با 659 آمینو اسید کد میکند که علاوه بر ناحیه 422 آمینو اسیدی به دست آمده در کریستالوگرافی دارای دو پپتید دیگر یکی 44 آمینو اسیدی در انتهای آمین (با مشخصات پپتیدهای نشانه مسیر ترشحی sec) و دیگری 193 آمینو اسیدی در انتهای کربوکسیل است. آنزیم بدون پپتید انتهای کربوکسیل km و kcat بیشتری را در مقابل دو سوبسترای نشاسته و eps نشان میدهد. برای بررسی نقش این پپتید در ترشح آنزیم چهار فرم نوترکیب مختلف از bka با و بدون پپتیدهای انتهای آمین و انتهای کربوکسیل[bka, bka?(c193), bka?(n44) and bka?(n44c193)] در باکتری e. coli bl21 تولید شدند. آنزیمهای با پپتید انتهای کربوکسیل بیشتر از دو فرم دیگر به محیط کشت ترشح میشدند که نشانهای از نقش این قطعه در ترشح آنزیم است که در این مطالعه به تفصیل در مورد آن بحث میشود. به علاوه حضور فرمهای آنزیمی فاقد پپتید نشانه انتهای آمین در محیط کشت ترشح غیر وابسته به پپتید نشانه را نشان میدهد که میتواند به علت تشکیل ساختار کره مذاب در محیط اسیدی اطراف فسفولیپیدهای غشایی باشد. تشکیل ساختار کره مذاب دو فرم آنزیمی bka?(n44) و bka?(n44c193) در محیطهای اسیدی با فلورسانس ذاتی، و اتصال ans تایید شد.