سم t-2 در بین تریکوتسن ها سمی ترین است و اغلب توسط fusarium sporotrichioides تولید می شود. این مایکوتوکسین محصولات کشاورزی به ویژه غلات را آلوده نموده، می تواند سبب بیماری های شدید و حتی مرگ در انسان و یا حیوانات شود. هدف اصلی تحقیق طراحی پروتوکلی مبتنی بر توالی ژن tri3 است تا فوزاریوم های مولد سم t-2 را شناسایی نماید. در این بررسی تعداد 109 نمونه گندم و 87 نمونه ذرت مطابق با روش ista در طول سال های 85 تا 86 تهیه گردید. به منظور جدا سازی فوزاریوم ها از گندم از روش فلوتاسیون با مالاشیت گرین آگار 25/0 (fm) و روش کاغذ صافی (fb) استفاده گردید. جهت جداسازی فوزاریوم ها از ذرت از محیط های کشت مالاشیت گرین آگار 5/2 و دی کلران کلرآمفنیکل پپتون آگار (dcpa ) استفاده شد. فوزاریوم های جدا شده به روش کشت تک اسپور بر روی محیط wa، خالص و به روش کشت در محیط های sna، cla، pda و مشاهده خصوصیات ماکروسکوپی و میکروسکوپی مورد شناسایی قرار گرفتند. به روش its-rflp با استفاده از چهار آنزیم hhai، mspi، taqi و faqi فوزاریوم های جدا شده شناسایی مولکولی گردیدند. ضمن طراحی جفت پرایمری جهت ژن tri3 ، قطعه ژن tri3 (416 جفت باز) در جدایه های فوزاریوم و گونه های استاندارد ردیابی گردید. جدایه ها و گونه های واجد ژن tri3 و تعدادی از جدایه های فاقد ژن tri3 به روش hplc-f بعد از مشتق سازی با 1- آنترول نیتریل مورد بررسی تولید سم t-2 قرار گرفتند. در پایان حساسیت و ویژگی ردیابی ژن tri3 به همراه قطعه ژن gbss1 در نمونه گندم های آلوده مورد مطالعه قرار گرفت. در این مطالعه 139 جدایه فوزاریوم بدست آمد که متعلق به 16 گونه فوزاریوم بود. گونه فوزاریوم غالب غلات گندم و ذرت را به ترتیب f. proliferatum و f. verticilloides تشکیل داد. گونه آتیپیک f. langsethiae جدا گردید که از نظر مورفولوژی و ژن its با f. langsethiae و از جهت ژن tef1-? با f. sporotrichioides مطابقت داشت. بر اساس اطلاعات موجود این گونه برای اولین بار در ایران و آسیا گزارش می شود. این گونه تنها جدایه ای بود که واجد ژن tri3 و مولد سم t-2 بود. در این مطالعه روش pcr-rflp طراحی گردید که با بکار بردن حداکثر 4 آنزیم اندونوکلئاز می توان حداقل 22 گونه فوزاریوم را از یکدیگر افتراق داد. در این بررسی جفت پرایمرطراحی شده بر اساس ژن tri3 توانست فوزاریوم های مهم مولد سم t-2 مثل f. sporotrichioides و f. langsethiae را شناسایی کند. توصیه می شود مطالعاتی در سطح وسیع بر روی غلات ایران از نظر وجود این دسته فوزاریوم ها و متابولیت های سمی آنها صورت گیرد.

در این تحقیق اثرات ضد کاندیدایی اسانس های مرزه خوزستانی و مورت سبز در مدل رت ایمونوساپرس مبتلا به کاندیدیازیس دهانی در شرایط درون تنی مورد بررسی قرار گرفت و از نیستاتین به عنوان شاهد دارویی استفاده شد.. در این مطالعه 42 سر رت در 6 گروه 7 تایی که شامل : 1-گروه درمان شده با اسانس مرزه خوزستانی 2- گروه درمان شده با اسانس مورت سبز 3- گروه درمان شده با نیستاتین 4- گروه دارونما 5- گروه غیر ایمنوساپرس ولی آلوده 6- گروه ایمنوساپرس اما غیر آلوده بودند ، قرار گرفت.ارزیابی سطح عفونت وتعیین اثرات درمانی به وسیله روش های میکروبیولوژیکی و هیستو پاتولوژیکی و معاینات بالینی صورت گرفت .برای ارزیابی میکروبیولوژیکی در مراحل مختلف تحقیق طی 5 نوبت شامل قبل از ایمنوساپرس ، بعد از ایمنوساپرس و قبل از تلقیح و در روزهای صفر ، چهار و هشت درمان از دهان حیوانات به وسیله سواپ استریل نمونه گیری به عمل آمد.سپس سوآپ ها در یک میلی لیتر سرم فیزیولوژیک استریل قرار گرفته و پس از هموژنیزه نمودن آنها ، برای تعیین میانگین کمیت cfu ، اقدام به کشت نمونه ها نمودیم . تعیین cuf بصورت دوبلیکیت صورت گرفت . ارزیابی سطح عفونت و تعیین میزان اثرات داروها توسط تعیین cfu در گروه های درمان شده و مقایسه آنها با گروه دارونما ارزیابی شد و برای مقایسه سطح معنی دار بودن تفاوت های گروه دارونما با سایر گروه ها از آزمون independent sample t-test و برای بررسی سطح معنی داری تفات های گروه ها در طی روند درمان از آزمون تجزیه واریانس یک طرفه استفاده گردید . برای ارزیابی هیستوپاتولوژیک ، در پایان دوره درمان ( روز هشتم ) زبان همه رت های موجود در گروه های مختلف درمانی از دهان خارج و پس از مرحله ثبوت و طی مراحل پاساژ بافتی با دو متد رنگ آمیزی h&e و pas رنگ آمیزی شدند و با مشاهده یا عدم مشاهده عناصر مخمری و هایفی و نفوذ آنها به داخل اپیتلیوم سطح پشتی زبان مورد ازیابی قرار گرفتند . از مجموع ارزیابی های میکروبیولوژیکی و هیستوپاتولوژیکی و معاینات بالینی دهان رت ها چنین نتیجه گیری شد که درمان کاندیدیازیس دهانی توسط اسانس مرزه خوزستانی با غلظت دارویی معادل 2 برابر mic در رت های ایمنوساپرس به مدت یک هفته کاملا موفقیت آمیز بوده و معادل یک هفته درمان توسط نیستاتین با غلظت دارویی معادل 10 برابرmic بوده است. اما در خصوص اسانس مورت با توجه به نتایج میکروبیولوژیکی و هیستوپاتولوژیکی هنوز کانون های محدودی از عفونت در برخی از نقاط مخاط پشت زبان وجود داشت که ممکن است بصورت نهفته باقی مانده و باعث عود بیماری گردد و به نظر میرسد که درمان توسط اسانس مورت سبز با غلظت دارویی معادل 2 برابر mic برای ریشه کنی کاندیدیازیس دهانی در رت های ایمنوساپرس کافی نبوده است .

کاندیدا آلبیکنس مقاوم به فلوکونازول عامل کاندیدیازیس دهانی در بیماران با نقص سیستم ایمنی می باشد. هدف این مطالعه ارزیابی حساسیت و ردیابی ژن های مقاومتی (1mdr ، 1cdr) نسبت به داروی فلوکونازول در ایزوله های بالینی کاندیدا آلبیکنس جدا شده از بیماران ایدزی می باشد. در شرایط آزمایشگاهی حساسیت 66 ایزوله بالینی کاندیدا آلبیکنس نسبت به فلوکونازول ارزیابی شد. حساسیت به داروی فلوکونازول با استفاده از مایکرودایلوشن براث و دیسک دیفیوژن مطابق روش clsi انجام شد. از 66 ایزوله کاندیدا آلبیکنس تست شده با روش تعیین حساسیت دیسک دیفیوژن به ترتیب 45 ایزوله (% 18/68) حساس، 5 ایزوله (% 58/7) وابسته به دوز و 16 ایزوله (% 24/24) مقاوم به فلوکونازول بودند، در حالیکه با روش مایکرودایلوشن براث 43 ایزوله (% 15/65) حساس، 8 ایزوله (% 12/12) وابسته به دوز و 15 ایزوله (% 73/22) مقاوم به فلوکونازول تعیین گردید. مکانیسم مولکولی مقاومت به داروهای آزولی در کاندیدا آلبیکنس شامل بیان بیش از اندازه ژن های پمپ انتشار (1mdr ، 1cdr) و تغییرات در آنزیم هدف می باشد. در این مطالعه آنالیز مولکولی برای تمامی ایزوله ها انجام شد. rna تمامی ایزوله ها استخراج و cdna آنها سنتز شد. سپس با استفاده از پرایمر های 1mdr ، 1cdr و 1act،pcr rt- انجام شده و آنالیز شدت باند ها با استفاده از نرم افزار تعیین گردید. بیان بیش از اندازه ژن های 1mdr و 1cdr به ترتیب برای 2 و 8 ایزوله کاندیدا آلبیکنس تعیین گردید. درصد فراوانی برای بیان بیش از اندازه ژن 1mdr و 1cdr به ترتیب% 03/3 و %12/12 درصد می باشد.

امروزه قارچهای بیماریزای فرصت طلب جزء عفونت های تهدید کننده زندگی در بیماران با نقص سیستم ایمنی می باشند. بیماری های قارچی در بیماران ایدزی اغلب به صورت کاندیدیازیس دهانی حلقی تظاهر می یابد وعوامل ایجاد کننده آن از قارچهای مخمری کاندیدایی می باشد که شایعترین آنها کاندیدا آلبیکنس است.کاندیدیازیس دهانی از عفونت های شایع در بیماران ایدزی است واز اولین یافته های بالینی ویروس hiv می باشد.درمان توسط عوامل ضد قارچی آزولی بویژه فلوکونازول به عنوان راه کاری موثر جهت درمان عفونت های ناشی از مخمر کاندیدا آلبیکنس معرفی می شود،اما بروز مقاومت های دارویی این روش درمان را با مشکلات جدی روبرو ساخته است.لذا شناسایی گونه های مقاوم به عوامل ضد قارچی جهت درمان کارآمد وجلوگیری از مصرف بی رویه داروها بسیارضروری می باشد. هدف از این مطالعه شناسایی گونه های مقاوم به فلوکونازول در کاندیدا آلبیکنس های بومی جداشده از ضایعات دهانی افراد ایدزی با روش های فنوتیپی و مولکولی rt-pcr با تاکید بر دو ژن عامل مقاومت به داروی فلوکونازول( cdr2و(erg11 می باشد.در این مطالعه جهت تایید نمونه های مورد بررسی، ابتدا از کشت نمونه ها برروی محیط کروم آگارکاندیدا،آزمایش های کلامیدوسپور و لوله زایا استفاده شد.با روش دیسک دیفیوژن میزان حساسیت ایزوله ها به فلوکونازول تعیین گردید.پس از استخراج rna و تبدیل آن به cdna با پرایمرهای اختصاصی ژن های cdr2وerg11 واکنش rt-pcr انجام شد.پس از انجام الکتروفورز محصول pcr، الگوی باندهای حاصله با الگوی باندهای حاصل از گونه های استاندارد حساس ومقاوم به فلوکونازول بررسی وجهت اندازه گیری میزان بیان ژنerg11 ، نسبت این ژن به house keeping act1 توسط نرم افزار uvitec analyze محاسبه گردید. با استفاده از روش دیسک دیفیوژن 18/68% نمونه ها حساس،58/7% وابسته به دوز و24/24% مقاوم به فلوکونازول بودند.در تمامی روش های ژنوتیپی نقطه هدف (dna یاrna) از تغییر ناپذیری بالایی برخوردارند،امروزه تکنیک های مولکولی به علت حساسیت بالا بسیارمورد توجه می باشند، با بررسی نمونه ها توسط روش rt-pcr، 4 ایزوله دارای بیان ژن cdr2 و6 ایزوله دارای بیان بیش از اندازه ژن erg11 بودند. شیوع عفونت های کاندیدایی ومتعاقب آن درمان توسط عوامل ضد قارچی به خصوص ترکیبات آزولی ومقاومت نسبت به این ترکیبات، ضرورت استفاده از روش های تعیین حساسیت دارویی را بیش از پیش آشکار ساخته است. به هر حال مطلوب آن است که از روش های فنوتیپی مانند دیسک دیفیوژن که هزینه کمتری داشته همراه با روش های ژنوتیپی مانند rt-pcr که امکان بررسی مکانیسم های مقاومت دارویی و ژن های دخیل درآن را ایجاد می کند، استفاده شود.

مقدمه: کاندیدیازیس بیماری قارچی شایعی است که توسط گونه های مختلف جنس کاندیدا ایجاد می شود. اگر چه کاندیدا آلبیکنس عامل شایعتر ایجاد بیماری است اما در دهه های اخیر شیوع گونه های غیر آلبیکنس رو به افزایش است. هدف از مطالعه ی حاضر شناسایی گونه های جدید(candida orthopsilosis,candida metapsilosis, candida nivariensis,candida bracarensis ) در نمونه های مختلف بالینی در ایران با استفاده از روش pcr-rflp می باشد. روشها: dna ژنومی مخمری 947 جدایه با استفاده از فیلتر fta از کشت تازه استخراج شد. ابتدا ناحیه its مخمرها با پرایمر های عمومی its1 و its4 تقویت و پس از برش آنزیمی باmspi گروه کاندیدا پاراپسیلوزیس و گلابراتا شناسایی شد. سپس ژن sadh تقویت و سه گونه کاندیدا پاراپسیلوزیس، متاپسیلوزیس و ارتوپسیلوزیس به کمک هضم آنزیمی با nlaiii افتراق داده شد. در گروه گلابراتا با استفاده از پرایمر های its1 و its2 ، pcr انجام شد و با توجه به اختلاف اندازه محصولات pcr ، گونه های براکارنسیس، نیوارینسیس و گلابراتا از هم افتراق داده شد. نتایج: از مجموع 947 جدایه استفاده شده در این مطالعه، بیشترین ایزوله ها به ترتیب آلبیکنس ( 541 ایزوله = 1/57 % )، پاراپسیلوزیس ( 128 ایزوله = 5/13 % )، گلابراتا ( 82 ایزوله = 6/8 % )، تروپیکالیس ( 80 ایزوله = 4/8 % )، کفیر ( 68 ایزوله = 1/7 % )، کروزه ای ( 42 ایزوله = 4/4 % ) و گیلیرموندی ( 6 ایزوله = 6/0 % ) بود. در مجموع 1/57 % ایزوله ها آلبیکنس و 9/42 % غیر آلبیکنس بود. در گروه پاراپسیلوزیس، 18 ( 14% ) جدایه کاندیدا ارتوپسیلوزیس، شناسایی شد. هیچیک از سه گونه متاپسیلوزیس، براکارنسیس و نیوارینسیس در بین جدایه ها یافت نشد. نتیجه گیری:کاندیدا ارتوپسیلوزیس گونه کمیابی در ایران نبوده و به نظر می رسد تعداد زیادی از استرین هایی که ممکن است در ایران به عنوان کاندیدا پاراپسیلوزیس شناسایی شوند، در واقع گونه ارتوپسیلوزیس باشند.

درماتوفیتوزیس یک بیماری شایع جلدی قارچی است که انتشار جهانی داشته و از نظر بهداشتی با اهمیت می-باشد که پوست و ضمائم آن مانند مو و ناخن را درگیر می کند. شدت بیماری علاوه بر سوش عامل و حساسیت میزبان به قارچ مولد، به وضعیت عمومی بیمار نیز بستگی دارد. بیشترین عامل عفونت قارچی ناخن یا اونیکومایکوزیس، ترایکوفیتون روبروم شناخته شده است. اگرچه این عفونت در افراد مبتلا به نقص سیستم ایمنی به شکل تهاجم موضعی، عمقی یا منتشره چند ارگانی درمیآید که در رفرانس های علمی به اسـامی tinea; ringworm و کچلی مطرح می شود. گونه های مختلف مخمرها، درماتوفیت ها و ساپروفیت ها یا کپک ها نیز ایجاد عفونت اونیکومایکوزیس می کنند. روش های متداول فعلی مانند آزمایش مستقیم میکروسکوپی و کشت، زمانبر بوده و از طرفی وجود احتمال منفی کاذب دراین دو روش، جواب گوی همه گیری این بیماری در بیماران مختلف از جمله بیماران ایمونوساپرس که به هر دلیلی سیستم ایمنی شان تضعیف شده است نمی باشد. روش بکار برده شده در این مطالعه، برای اولین بار در ایران تعداد 186 بیمار مشکوک و آلوده به انیکومایکوزیس، یا عفونت قارچی ناخن را به صورت مستقیم مورد بررسی و تشخیص مولکولی قرار داد که ازین تعداد 140 نفر زن (75%) و 46 نفر مرد (25%) با درگیری ناخن های دست و پا بوده اند. امروزه اهمیت بکار گیری پروتکلهای درمانی هدفمند و کارآمد، بر علیه آلودگی به گونه های مختلف درماتوفیتها برپایه تشخیص سریع و دقیق عامل عفونی احساس می شود. در بسیاری از کشورها از روشهای مولکولی متعدد و متنوعی برای تشخیص طیف وسیعی از بیماریهای عفونی سود می برند. واکنش زنجیره ای پلیمراز تکنیکی است که به طور گسترده در بیولوژی مولکولی بکارگرفته می شود. با پیشرفت تکنولوژی pcr و با استفاده از real time pcr سرعت تشخیص آزمایشگاهی انواع بیماری ها ازجمله درماتوفیتوزیس نیز درحال افزایش است که میتواند تشخیص سریع و شناسایی درماتوفیت ها را از مقادیر ناچیز مواد اولیه (نمونه بالینی) در ظرف چندین ساعت امکان پذیرکند. در این تحقیق علاوه بر روش های رایج آزمایش مستقیم و کشت، به صورت مقایسه یی از هر دو روش معمول pcr و پیشرفته real time pcr نیز استفاده گردید. از مجموع 186 نمونه بالینی بیماران در pcr معمولی، 92 نفر با پرایمر اختصاصی روبروم " t-rub" مثبت (49%) و 161 نفر با پرایمر یونیورسال قارچ its1&4 (86%) مثبت شده اند که 92 نفر اختصاصی روبروم نیز شامل آن شده و 25 مورد هم، منفی باقی ماند. همچنین از مجموع 186 نمونه pcr معمولی، تعداد 112 نمونه بالینی آن با real time pcr ارزیابی شد که 25 مورد منفی pcr معمولی نیز شامل آن می شود. از مجموع موارد منفی، 19 مورد آن در real time pcr مثبت و 6 مورد باز هم منفی باقی ماند.

بتا 1-3 گلوکان به عنوان یک عامل ایمنومدولاتور شناخته شده است که قادر است با اتصال به رسپتورهای ویژه ای که بر روی سلول های سیستم ایمنی دارد، موجب فعالیت آن سلول ها و متعاقب آن فعالیت ضد توموری گردد. زمانی که بتا -1-3 گلوکان به همراه داروهای شیمی درمانی تجویزگردد، برایند اثر ضد توموری افزایش داشته و موجب تسریع درمان تومور می گردد. در تحقیق حاضر یک سیستم داروئی هدفمند در ابعاد نانو ساخته شده است که جنس حامل آن بتا 1-3 گلوکان موجود در دیواره قارچ کاندیدا آلبیکنس است. داروی دکسوروبیسین توسط این سیستم به صورت هدفمند توسط آنتی بادی تراستوزوماب به سمت سلول های her?+ حمل می گردد. نانوذرات نشان دار شده توسط آنتی بادی، دارای قدرت جذب بالاتری نسبت به نانوذرات نشان دار نشده به درون سلول های her?+ می باشد و به دنبال آن قدرت سلول کشی بالاتری در شرایط in vitro و in vivo دارد. بتا 1-3 گلوکان ابتدا توسط لینکر سوکسینیک انهیدرید به دکسوروبیسین اتصال کووالانت برقرار نموده و سپس با افزودن شاخه های پلی اتیلن ایمین بار سطجی را به حدود 18+ رسانده تا جذب بالایی به سلول توموری داشته باشد. نانوذرات توسط سونیکاتور به صورت خود تجمعی ساخته شده و نهایتاً توسط آنتی بادی تراستوزوماب نشان دار گردید. کانژوگه حاصل ( glu-dox) توسط (ft-ir)، (1h-nmr) و (dsc) تأیید گردید. مطالعه میکروسکوپ الکترونی نیز نانوذرات گرد با سطح صاف و اندازه 160 نانومتری را تأئید نمود. مطالعه چگونگی آزاد شدن دارو از نانوذرات در in vitro نشانگر قدرت بالای نگهداری نانوذرات حاوی داروی کانژوگه نسبت به نوع غیر کانژوگه بود. نتایج ; in vivo که پس از گذشت 35 روز از توموری و درمان نمودن موش های ماده balb/c توسط گروه های مختلف نانوذره و کنترل بدست آمد، بیانگر افزایش قدرت ایمنی ذاتی و اکتسابی موش های گیرنده نانوذرات بود که در این فرایند نانوذرات نسبت به دارو ها به عنوان گروه های کنترل، از اندیکس طحال بالاتر و میزان ifn-? و tnf-aبالاتر و کاهش در سطح il-? و کاهش بیشتر حجم تومورهای تجربی، برخوردار بود که نتایج پاتولوژیک نیز موید میزان بالای آپوپتوز و نکروز در محل تومور موش های گیرنده نانوذرات با میزان بتا1-3گلوکان بالاتر بودند. لذا سیستم داروئی طراحی شده در درمان هدفمند سرطان که با افزایش ایمنی ضد توموری همراه است، بسیار امید بخش جلوه نموده است.