موضوع: شناسایی و تعیین هویت مولکولی ویروس ppr بر اساس ژن n در نشخوارکنندگان کوچک استان کرمانشاه نگارنده: آزاده فروغی شماره پایان نامه: 110-1 سال تحصیلی: 92-1391 طاعون نشخوارکنندگان کوچک (peste des petits ruminants - ppr) بیماری عمومی و فوق العاده مسری گوسفند و بز است. عامل بیماری موربیلی ویروس (morbillivirus) است که در خانواده پارامیکسوویریده (paramyxoviridae) قرار دارد. بیماری خسارات اقتصادی قابل توجهی به کشاورزان و دامداران وارد می کند. مرگ ومیر و واگیری می تواند تا 95 درصد باشد. اگرچه، تنها یک سروتیپ از ویروس وجود دارد، بر پایه آنالیز توالی قسمتی از ژن پروتئین اتصال (f) و ژن پروتئین نوکلئوکپسید (n) ویروس ppr را می توان در چهار نسل (i, ii, iii, iv) متفاوت گروه بندی کرد. از آنجا که بیماری ppr در کشور ایران و به خصوص در برخی استان ها ازجمله استان کرمانشاه بیماری مهم دامی و معضل بزرگ صنعت دامپروری است، هدف مطالعه حاضر، شناسایی و تعیین هویت مولکولی ویروس ppr در نشخوارکنندگان کوچک استان کرمانشاه بر اساس ژن n بود. بدین منظور از 66 رأس گوسفند و بز مشکوک به بیماری، سرم و سواب های چشمی و بینی تهیه شد. با انجام تست الایزا از تعداد 63 نمونه سرم، 43 نمونه مثبت (68%) و با انجام rt-pcr بر روی 66 نمونه سواب اخذشده، 7 نمونه مثبت (60/10%) شدند. نمونه های سرم خون مربوط به حیواناتی که pcr آنها مثبت شده بود، با روش الایزا از نظر وجود آنتی-بادی های ضد ppr، در پنج مورد مثبت شده و در دو مورد دیگر منفی شدند. در ارسال نمونه های مثبت-شده در rt-pcr برای تعیین توالی ماده ژنتیکی (sequencing)، از 7 نمونه، یک نمونه غیرقابل خوانش اعلام شد و 6 نمونه دیگر تعیین توالی شده و با مقایسه آن ها با توالی نوکلئوتیدی چهار نسل ویروس ppr، ویروس های تشخیص داده شده از نسل iv تعیین گردید. همچنین با ترسیم درخت فیلوژنتیکی، میزان شباهت آنها با یکدیگر و نیز با جدایه های موجود در بانک ژنی مقایسه شد. از این 6 نمونه، 2 نمونه به یکدیگر نزدیکتر و از 4 نمونه دیگر دورتر بودند.

برونشیت عفونی بیماری حاد و بسیار مسری دستگاه تنفس طیور است که سالیانه خسارات زیادی به صنعت طیور کشور وارد می سازد. برای انجام این تحقیق 106 نمونه بالینی شامل کلیه، ریه و نای از مزارع پرورش مرغ گوشتی مشکوک به بیماری برونشیت عفونی در استان کرمانشاه جمع آوری شد. نمونه ها در محیط انتقال در کنار یخ به آزمایشگاه بخش تحقیقات دامپزشکی مرکز تحقیقات کشاورزی و منابع طبیعی استان کرمانشاه منتقل، و تا زمان آماده سازی برای تزریق در تخم مرغ های جنین دار 10 روزه در دمای منهای 80 درجه سانتی گراد نگه داری شدند. نمونه ها در محیط انتقال با نسبت (وزن/حجم) به صورت 10 درصد همگن و سانتریفوژ شد. به یک صد میکرولیتراز هریک از نمونه های همگن شده 100 میکرولیتر محیط انتقال اضافه و پس از 4 ساعت انکوباسیون به 3 عدد تخم مرغ جنین دار 10 روزه تزریق شد. بعد از 72 ساعت تخم مرغ ها به یخچال معمولی با دمای 4 درجه سانتی گراد منتقل، و 6 ساعت در این دما نگه داری شدند. مایع آلانتوئیک با استفاده از سرنگ 5 میلی لیتری استریل جمع آوری و آزمایش هماگلوتیناسیون و ممانعت از هماگلوتیناسیون برای تشخیص تفریقی با ویروس های نیوکاسل و آنفلوآنرا انجام شد. سپس با استفاده از کیت استخراج rna (viogene) از نمونه های آلانتوئیک استخراج و آزمایش rt-pcr انجام و محصول آن بر روی ژل آگاروز یک درصد الکتروفورز شد. محصول pcr با استفاده از کیت تجاری (bioneer, korea) تخلیص و جهت تعیین توالی به شرکت بایونیر کره جنوبی ارسال شد. نتایج آزمایش هماگلوتیناسیون نشان داد که 27 نمونه مثبت بود. آزمایش ممانعت از هماگلوتیناسیون نیز نشان داد که 10 نمونه نیوکاسل، 7 نمونه آنفلوانزا و 10 نمونه باقی مانده آنفلوانزا و نیوکاسل بود. آنالیز محصول pcr برروی ژل آگارز نشان دهنده مثبت بودن دو نمونه بود. نتایج تعیین توالی و مقایسه آن با توالی ویروس های برونشیت عفونی موجود در بانک ژن با نرم افزار dnastar نشان داد که سوش های جدا شده در این تحقیق مشابهت زیادی با ویروس های برونشیت عفونی گروه qx دارد