الانزاپین (olz) یک آنتی سایکوز آتپیک، تائید شده توسط fda برای درمان بیماران مبتلا به اسکیزوفرنی و اختلال دو قطبی است. در این کار پژوهشی میکرو استخراج مایع مایع پخشی(dllme) همراه با کروماتوگرافی مایع با کارآیی بالا، برای تعیین مقدار الانزاپین در ماتریکس دارویی و مایعات بیولوژیکی مورد استفاده قرار گرفته است. در این روش مخلوط مناسبی از حلال استخراج کننده l)µ100 کلروفرم( و حلال پخش کننده) ml1 متانول (به سرعت توسط سرنگ به نمونه ی آبی (ml10) تزریق می شود. در نتیجه یک محلول ابری تشکیل می گردد که در واقع شامل قطرات بسیار ریز حلال استخراج کننده است که کاملاً در فاز آبی پخش شده است. مخلوط حاصل سانتریفیوژ شده و حلال استخراج کننده در ته یک لوله آزمایش با انتهای مخروطی جمع آوری شد. فاز ته نشین شده توسط یک میکروسرنگ برداشته شده و پس از تبخیر حلال آن، در ml1 متانول حل شد وµl 25 آن برای جداسازی و شناسایی به دستگاه hplc تزریق گردید. برخی پارامترهای موثر بر روی استخراج از قبیل نوع و حجم حلال استخراجی و پخش کننده، زمان استخراج، ph محیط و قدرت یونی محلول بهینه شدند. در شرایط بهینه فاکتور تغلیظ و بازیابی استخراج به ترتیب 10 و 93.64% می شود. محدوده ی خطی بودن 100-0.1 میلی گرم بر لیتر و حد تشخیص 12.3میکروگرم بر لیتر می باشد.

توکسوپلاسماگوندی انگل داخل سلولی اجباری و یک پاتوژن مهم انسانی و حیوانی است که حداقل 3/1 جمعیت جهانی آلوده به آن می باشند. این انگل متعلق به خانواده اپی کمپلکساست و تاکی زوئیت های آن مرحله مهمی از سیکل زندگی این انگل و عامل بیماری توکسوپلاسموز است.توکسوپلاسماگوندی در انسان ها می تواند باعث چندین سندروم بالینی نظیر انسفالیت، کوریورتینیت، و عفونت مادرزادی شده و در حیوانات نیز(به خصوص گوسفند و بز) با سقط جنین، مرده زائی ضررهای اقتصادی فراوانی را باعث می شود. در مطالعه حاضر پروتئین های آنتی ژن محلول تاکی زوئیت توکسوپلاسما گوندی(stag) مورد شناسایی قرار گرفتند این آنتی ژن ها ممکن است در شناسایی و پیشگیری از توکسوپلاسموز مفید باشند.بطور خلاصه روش مطالعه به شرح زیر بوده است: • تزریق تاکی زوئیت به صفاق موش های balb/c • کشیدن مایع صفاقی موش (حاوی تاکی زوئیت) حدوداً 72-96 ساعت پس از تزریق • تهیه آنتی ژن محلول تاکی زوئیت(stag) • پروتئین سنجی به روش لوری • تهیه پروفایل پروتئینی با استفاده از روش الکتروفورز یک بعدی(sds-page) • آشکارسازی باندها با روش کوماسی بلو و سپس رنگ آمیزی نیترات نقره • برآورد وزن مولکولی باندها با استفاده از ماکر و رسم منحنی استاندارد و محاسبه rf • ایمن سازی حیوان آزمایشگاهی(خرگوش) و تهیه آنتی سرم ضد توکسوپلاسما • وسترن بلات طبق نتایج حاصله در ژل الکتروفورز 13 باند در محدوده وزن مولکولی 82-28 کیلودالتون ظاهر شد که با آنالیز وسترن بلات با سرم ضدتوکسوپلاسما خرگوش، 7 باند به عنوان آنتی ژن های ایمنودومینانت شناسایی شدند.

در این تحقیق آنزیم تریپسین از ضمائم پیلوریک ماهی کیلکای معمولی دریای خزر از طریق راسب سازی با آمونیوم سولفات (60-30 درصد)، کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون (سفادکس جی 75) و تعویض یونی (دی اتیل آمینو اتیل – سلولز) تخلیص گردید. میزان تخلیص تا 3/28 برابر و میزان بازده تا 12درصد بدست آمد. وزن مولکولی تریپسین تخلیص شده بر اساس سدیم دو دسیل سولفات- پلی اکریل آمید ژل الکتروفورزیز(sds-page) 2/23 کیلودالتون بود و بر اساس native-page وsubstrate-gel الکتروفورزیز فقط دارای یک ایزوفرم بود. شناسایی ویژگی های بیوشیمیایی آنزیم تریپسین تخلیص شده از ضمائم پیلوریک ماهی کیلکای معمولی دریای خزر (ckt) و آنزیم پانکراتیک خوک (pt) نشان داد که دما و ph بهینه برای هر دو آنزیم به ترتیب c°60 و 8 بود. پایداری دمایی برای آنزیم تریپسین ckt تا c° 45 و برای pt تا c°50 بود. پایداری ph برای آنزیم تریپسین ckt در محدوده 10-7 و برای آنزیم تریپسین خوک در محدوده 11-4 قرار داشت. فعالیت آنزیم تریپسین cktو pt در برابر مهارکننده های sbti و tlck کاهش معنی داری را با نمونه شاهد که فاقد مهارکننده بود نشان دادند بطوریکه درckt این مهارکنندگی به 100 درصد رسید (05/0>p). pmsf و پاراآمینوبنزآمیدین نیز باعث مهارکنندگی معنی داری در فعالیت آنزیم تریپسین درckt و pt گردیدندکه با نمونه شاهد اختلاف معنی داری را نشان داد (05/0>p). مهارکننده های tpck و بتامرکپتواتانول هیچگونه اثر مهارکنندگی بر روی آنزیم تریپسین ckt نداشتند (05/0> p) ولی درpt کاهش معنی داری را در فعالیت آنزیم تریپسین ایجاد نمودند (05/0> p). پپاستاتین a، یدواستیک اسید و edta اثر مهارکنندگی معنی داری در فعالیت آنزیم تریپسین در ckt و pt نشان ندادند (05/0<p). یون های فلزی کلسیم، منیزیم و منگنز باعث افزایش معنی دار فعالیت آنزیم تریپسین ckt و pt و یون های مس، روی، باریم، کبالت، آهن و آلومینیوم باعث کاهش معنی دار فعالیت آنزیم تریپسین در ckt و pt گردیدند (05/0>p). یون های سدیم و پتاسیم تاثیری در فعالیت آنزیم تریسینckt نداشتند (05/0<p) ولی در pt باعث کاهش معنی داری در فعالیت گردیدند(05/0>p). سورفاکتانت ها به استثنای سدیم دو دسیل سولفات (sds) اثر افزایشی معنی داری بر فعالیت آنزیم تریپسین ckt و pt نسبت به نمونه شاهد داشتند (05/0>p) در حالیکه sds باعث کاهش معنی داری در فعالیت آنزیم تریپسین ckt و pt نسبت به نمونه شاهد گردید (05/0>p). عوامل اکسیدکننده پراکسید هیدروژن و سدیم پربورات باعث کاهش معنی داری در فعالیت آنزیم تریپسین ckt و pt نسبت به نمونه شاهد گردیدند (05/0>p). مطالعه کینتیک آنزیم تریپسین cktو pt نیز نشان داد که مقدار ثابت میکائیلیس-منتن (km) برای آنزیم تریپسین ckt بطور معنی داری کمتر از pt بود (05/0>p). ثابت کاتالیزوری (kcat) و کارایی کاتالیزوری(kcat/km) ckt بطور معنی داری بیشتر از pt بود (05/0>p). نتایج این تحقیق نشان داد که پروتئاز تخلیص شده از ضمائم پیلوریک ماهی کیلکای معمولی با توجه به اثر مهارکنندگی کامل مهارکننده های اختصاصی sbti و tlck، آنزیم تریپسین بوده و از آنجائیکه این آنزیم در برابر pmsf که یک مهارکننده پروتئازهای سرین می باشد، دچار افت فعالیت گردید، بنابراین پروتئاز تخلیص شده یک پروتئاز سرین است.

چکیده زهر مار naja naja oxiana از قوی ترین ترکیبات سمی در بین سموم مارها محسوب می شود، این زهر مار به نوروتوکسین نوع پس سیناپسی سه انگشتی تعلق دارد که با گیرنده های استیل کولین میانکنش می دهد و منجربه از کار افتادن سیستم تنفسی می شود. مقدارld50 این سم در موش µg7/7تعیین شد. برای خنثی سازی سم یاد شده از روش سنجش ایمنی آنزیمی (الایزا) رقابتی و سنجش بیولوژیک ed50استفاده شد. هر دو نوع این تست ها برای تخمین قدرت سرم بر روی 15 نمونه که از اسب های هایپر ایمن گرفته شده بود ، انجام شد. نتایج آزمایش الایزای رقابتی برای تعیین قدرت سرم ضد مار نشان دادکه رقت 4000/1سرمی در این سیستم برای مهار حدود 50 درصد، مناسب است . دوز چالش5ld50سم برای تست خنثی سازی کشندگی برای همه سرم ها انتخاب گردید. الایزای رقابتی با سنجش بیولوژیکی رایج ed50مورد مقایسه قرار گرفت. همبستگی معناداری بین تیتر های الایزا و مقادیرed50 در سطح معناداری 01/0p< و949/0=r مشاهده گردید، نشان می دهدکه روش مورد مطالعه در این پژوهش در شرایط in vitroمی تواند ظرفیت خنثی سازی آنتی بادی های سرم را همانند سنجش بیولوژیک(in vivo) با دقت بالا تخمین بزند.نتایج پژوهش حاضر نشان می دهد الایزایی که کمپلکس آنتی ژن- آنتی بادی را اندازه می گیرد می-تواند جایگزین مناسبی برای سنجش خنثی سازی کشندگی در محیط بیولوژیک در موش ها باشد.

بیماری آنفلوانزا یکی از مهمترین بیماری های ویروسی است که به صورت مشترک در بین پرندگان و پستانداران وجود دارد و توسط ویروس های خاصی که عضوی از خانواده ی ارتومیکسو ویریده هستند ایجاد می شود. مخزن این بیماری پرندگان آبزی و مهاجر است و احتمال بروز این بیماری در هر منطقه وجود دارد. روش های متفاوتی برای تشخیص آنفلوانزای پرندگان موجود است ولی از نقطه نظر سرعت در تشخیص، الایزا یکی مهمترین روش های جاری می باشد. با توجه به شیوع آنفلوانزای حاد پرندگان در سال های گذشته در مناطق مختلف ایران و از طرفی مشکلات تشخیص این بیماری صرفا بر اساس علائم بالینی و کالبد شکافی، هدف از این پژوهش طراحی یک سیستم الایزا بر پایه ی نانوذرات طلا جهت تشخیص سریع و حساس آنفلوانزای مرغی می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه از ویروس آنفلو انزای تحت تیپ h9n2 به عنوان آنتی ژن استفاده شد. ابتدا مقدار کل پروتئین ویروس به وسیله ی روش lowry پروتئین سنجی شد و از آزمون checker board برای تعیین غلظت مناسب آنتی ژن جهتcoating به ته چاهک های میکروپلیت استفاده شد. همچنین آنتی بادی ثانویه با نانوذرات طلا نشاندار شد و رقت بهینه آنتی بای ثانویه نشاندار شده با نانو ذرات طلا نیز به وسیله ی همین آزمون تعیین گردید. سپس با تعیین cut off یک کیت نانو-الایزا طراحی شدو نمونه سرم های تهیه شده از موسسه ی تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی از نظر وجود آنتی بادی علیه ویروس مورد نظر بررسی شد و حساسیت و ویژگی کیت طراحی شده بدست آمد. نتایج: ویروس آنفلوانزای مورد مطالعه دارای mg/ml 15/0 پروتئین بود .بهترین غلظت آنتی ژن برای کوتینگ برابر با μg/ml 1 و رقت بهینه برای آنتی بادی ثانویه ی نشاندار شده با نانو ذرات طلا 8/1 بود. از 133 سرم مورد مطالعه در این پژوهش، 64 سرم منفی و 69 سرم مثبت بودند و با مقایسه ی این نتایج با نتایج حاصل از آزمایش همین نمونه ها با کیت طراحی شده بدون نانو ذرات، حساسیت 100%و ویژگی 92٪ محاسبه شد. بنابراین اینگونه نتیجه گیری می شود که روش طراحی شده می تواند یک روش تشخیصی مناسب برای ویروسh9n2 باشد.

بیماری آنفلوآنزای مرغی تحت تیپ h9n2 یکی از بیماری های ویروسی عفونی می باشد. این ویروس از نوع a در خانواده ارتومیکسو ویریده قرار دارد. بیماری آنفلوانزا، بسیار واگیر بوده و دستگاه های تنفس، گوارش، تولید مثل و اعصاب را درگیر می کند و در پرندگان میزان ابتلا و مرگ و میر بالا می باشد. این تیپ از ویروس در انسان و دیگر پستانداران نیز ایجاد بیماری می کند. از این رو تشخیص سریع عفونت جهت پیشگیری از شیوع این بیماری در جوامع انسانی وحیوانی حائز اهمیت است. هدف این مطالعه جداسازی و کشت سلول های تولیدکننده آنتی بادی منوکلونال علیه ویروس h9n2 از موش های آلوده جهت استفاده برای تولید کیت های تشخیصی الایزا بوده است.

بیماری آنفلوانزای پرندگان سالانه خسارت اقتصادی فراوانی به صنعت طیور در سراسر دنیا وارد می کند. آنفلوانزای پرندگان بیماری بسیار واگیرداری است که موجب بروز علایم در سیستم های تنفسی، گوارشی و اعصاب در طیف وسیعی از پرندگان می گردد و قابل انتقال به پستانداران از جمله انسان می باشد. ویروس آنفلوانزا، ویروسی پلی مورفیک از خانواده ارتومیکسوویروس ها است و این ویروس با ژنوم rna تک رشته ای، دارای 8 نوع پروتئین ساختاری و 2 نوع پروتئین غیر ساختاری بوده و نوکلئوپروتئین (np) از پروتئین های ساختاری و داخلی ویروس می باشد. این تحقیق به منظور معرفی روش ساده و کاربردی و سریع جهت جداسازی نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوانزای پرندگان صورت پذیرفت. پروتئین خالص شده را می توان به منظور تهیه آنتی سرم اختصاصی نوکلئوپروتئین استفاده نمود. به این منظور ابتدا ویروس آنفلوانزای پرندگان n_2 h_9 جداشده از مایع الانتوئیک تخم مرغهای جنین دار 10 روزه را سانترفیوژ و با استفاده از پلی اتیلن گلیکول 6000 و با وزن حجمی 10% و گرادیانت سوکوروز در شیب 60-30 درصد ویروس تخلیص گردید. با استفاده از دستگاه preparative electrophoresis(prepcell 491) پروتئین های ویروس آنفلوانزا جداسازی و به صورت فراکسیونهایی تهیه شد. میزان جذب پروتئین فراکسیون ها با دستگاه اسپکتوفوتومتر در nm280 مشخص شده و فراکسیونهای دارای جذب، لیوفریزه گردید و سپس آنالیز پروتئین با sds-page و رنگ آمیزی نیترات نقره مشخص نمود که نمونه هایی بدست آمده موردنظر حاوی نوکلئوپروتئین خالص بوده و عاری از سایر پروتئینهای ویروس است. نتایچ بررسی فراکسیونهای لیوفریزه شده حاوی نوکلئوپروتئین روی ژل اگار عدم حضور rna ژنوم ویروس همراه با نوکلئوپروتئین و خلوص بالای نوکلئوپروتئین را نشان داد.