میانکنش بین ترکیب سنتزی جدید سالن- کبالت(iii) دارای لیگاند شیف باز (n,n-دی پیریدوکسیل (1و4- بوتان دی آمین) به عنوان یک لیگاند چهاردندانه با dna تیموس گوساله، توسط روش های طیف سنجی uv-vis، فلورسانس، غیر طبیعی شدن دمایی بررسی گردید. این ترکیب سنتزی به هنگام اتصال به dna تیموس گوساله (ct dna)، افزایش در شدت جذب (هایپرکرومیسم) و جا به جایی به طول موج بلندتر (جابه جایی قرمز) در طیف های جذبی و نیز افزایش مقاومت dna در برابر دما برای فرآیند غیرطبیعی شدن را نشان می دهد. با استفاده از اطلاعات طیف سنجی uv-vis، ثابت پیوندی (kb)، m-1105×1/0 تخمین زده شده است. افزایش ct dna به محلول سالن-کبالت(iii) موجب کاهش در شدت نشر فلورسانس این ترکیب می گردد که به کمک معادله ی استرن- ولمر ثابت خاموشی مولکول dna (kcdna)، m-1 104× 9/0 برآورد گردیده است. همچنین نقطه ی تقاطع نمودار ایزوترم پیوندی نشان دهنده ی اندازه ی جایگاه اتصال، 8/1جفت باز به ازای هر مولکول ترکیب سنتزی در بافر tris-hcl است. ثابت اتصال dna و تعداد جایگاه اتصال به همراه سایر مشاهدات آزمایشگاهی نشان دهنده ی این است که حالت میانکنش ct dna با ترکیب سالن-کبالت(iii)، جای گرفتن بین جفت بازها است. همچنین میانکنش ترکیب سنتزی با dna پلاسمیدی ptz57r توسط مطالعات ژل الکتروفورز تأیید گردیده است. کلید واژه: سالن-کبالت(iii)؛ ct dna؛ طیف سنجی uv-vis؛ طیف سنجی فلورسانس؛ ژل الکتروفورز.

استفاده روزافزون از آنتی بیوتیک ها برای درمان انواع بیماری های عفونی زمینه را برای ایجاد سویه های مقاوم فراهم کرده است به طوری که امروزه برخی از سویه های باکتریایی تحت تأثیر هیچ یک از آنتی بیوتیک های رایج امروزی قرار نمی گیرند؛ بنابراین امروزه باید به دنبال جایگزینی مناسب برای این ترکیبات بود تا بتوان با این مشکل مقابله کرد. در این بین مشخص شده است که ترشحات پوستی دوزیستان سرشار از ترکیباتی با ماهیت پپتیدی است که اثرات قابل توجهی علیه انواع میکروب ها دارند. در این تحقیق با استفاده از ترشحات پوستی قورباغه مردابی بومی خراسان سعی بر آن داریم تا پپتید های جدید با اثرات ضد میکروبی را جداسازی کنیم. در این مطالعه دو پپتید ضد میکروبی جدید temporin-ra و temporin-rb با استفاده از کروماتوگرافی فاز معکوس از ترشحات پوستی قورباغه مردابی (rana ridibunda) خالص سازی و شناسایی شد. پپتید های جدید temporin-ra و temporin-rb به ترتیب از 14 و 12 اسید آمینه ساخته شده اند. نتایج ما نشان داد که این دو پپتید اثر مهاری بر روی انواع باکتری گرم مثبت و گرم منفی به ویژه باکتری های مقاوم بیمارستانی مانند staphylococcus aureus و streptococcus agalactiae را دارند. توالی و وزن مولکولی این دو پپتید با استفاده از اسپکتروسکوپی جرمی تعیین شد. پپتید temporin-ra دارای وزن مولکولی 1/1585 دالتون و پپتید temporin-rb دارای وزن مولکولی 5/1242 دالتون است. سلول های خونی انسان به خوبی این دو پپتید را تحمل می کنند به طوری که در غلظت ?g/ml60، پپتید temporin-ra ، تنها 3/1 درصد و پپتید temporin-rb ، 1/1 درصد همولیز نشان دادند. مقدار حداقل غلظت مهاری (mic) این دو پپتید بسیار مناسب است و در غلظت های پایین خاصیت میکروب کشی وسیعی دارند. به دلیل فعالیت ضد میکروبی با طیف وسیع و خاصیت همولیتیک پایین، احتمالاً بتوان از این دو پپتید جدید ، در درمان عفونت های موضعی استفاده کرد.

پپتیدهای ضدمیکروبی گروهی از پلی پپتیدهای کوچک هستند که سبب مهار رشد میکروبها می شوند. این پپتیدها، مولکولهای تاثیرگذار در سیستم ایمنی ذاتی جانوران از گیاهان تا مهره داران و بی مهره گان بوده و خصوصیات پیش التهابی دارند. غدد گرانولار موجود در پوست قورباغه منبع غنی از این پپتیدها است. در تحقیق حاضر، اثر سمیت و خصوصیات التهابی عصاره خام پپتیدی استخراج شده از قورباغه rana ridibunda و پپتید سنتزی بروینین-2آر بر سلولهای a549 مورد بررسی قرار گرفت. پس از کشت سلولهای سرطانی ریه، غلظتهای مختلف پپتید بر سلول تاثیر داده شد. سپس سمیت پپتیدها به وسیله تست mtt به صورت وابسته به دوز و زمان سنجش شد. به منظور بررسی بیان ژنهای پیش التهابی، پس از تاثیر غلظتهای مختلف عصاره خام و بروینین-2آر بر سلول، در سه زمان 6، 12 و 24 ساعت، rna سلول استخراج و cdna ساخته شد. پس از انجام rt-pcr نیمه کمی برای ژنهای il-1?، il-8 و il-6، سطح بیان این ژنها به روشreal time pcr کمیت سنجی شد. نتایج نشان داد، عصاره خام و پپتید بروینین-2آر سمیت نسبتاً مشابهی داشته و موجب کاهش حدود 20% بقاء سلولی شدند. علاوه بر این، پپتیدهای مورد بررسی، سبب افزایش بیان ژنهای مذکور در سطح mrna به صورت وابسته به دوز و زمان شدند. نتایج این تحقیق نشان داد که عصاره خام و پپتید سنتزی بروینین-2آر، از طریق پیشبرد برخی از فرایندهای التهابی، سبب القاء پاسخ دفاعی در رده سلولی a549میشوند.

پپتید ضد میکروبی temporin-ra(t-ra) استخراج شده از ترشحات پوستی قورباغه مردابیrana ridibunda، به صورت شیمیایی سنتز و با استفاده از روش rp-hplc خالص سازی شد. اثر سمیت پپتید در زمان ها و غلظت های مختلف، بر رده سلولی اپی-تلیال ریه (a549) به کمک تست mttسنجش شد. هم چنین فعالیت همولیتیک پپتید و تأثیر آن در مهار آنزیم مبدل آنژیوتنسین ((aceمورد بررسی قرار گرفت. علاوه بر این، تأثیر پپتید بر بیان فاکتورهای پیش التهابی مانندil-1? و il-8 در سلول های a549 مطالعه شد. بدین منظور، پس از تأثیر غلظت های مختلفی از پپتید (15، 30 و 50 میکروگرم بر میلی لیتر) در سه زمان 6، 12 و 24 ساعت، rna سلول ها استخراج و cdna سنتز شد. میزان بیان هر یک از ژن ها به روش rt-pcr نیمه کمی بررسی شد. نتایج آزمایشات نشان داد که پپتید ضد میکروبی temporin-ra می تواند بقاء سلول های a549 را به میزان 3 تا 13 درصد کاهش دهد. این پپتید فعالیت همولیتیک کمی داشت و موجب مهار آنزیم ace شد. هم چنین، به کمک روش rt-pcr نیمه کمی، مشخص شد که پپتید می تواند بیان ژن های il-1? وil-8 را به صورت وابسته به غلظت و زمان، در سلول هایa549 افزایش دهد. نتایج این تحقیق نشان داد که پپتید t-ra می تواند در کاهش فشار خون و القای فرآیندهای پیش التهابی نقش مهمی را ایفا کند.

چکیده ندارد.

این کار گزارشی از شناسایی، خالص سازی و تعیین ویژگی های یک نوع جدید از آنزیم آلفا آمیلاز از فلور میکروبی طبیعی چشمه آبگرم و معدنی فردوس است. در اولین مرحله، جداسازی و کشت باکتری و شناسایی نسبی جنس آن بوسیله روشهای بیوشیمیایی و مولکولی مرسوم انجام پذیرفت و سپس تعیین شرایط بهینه برای رشد و همچنین برای تولید آنزیم های گلیکولیتیک مانند آمیلازها، انجام شد. در مرحله بعد، خالص سازی آنزیم تولید شده بوسیله کروماتوگرافی ion-exchange با رزین q-sepharoseدر یک روند چند مرحله ای ادامه یافت بطوریکه که در پایان مراحل خالص سازی میزان خلوص آنزیم 23 برابر محیط کشت اولیه آن بود. بررسی های بیوشیمیایی بر روی این آنزیم نشان دهنده ویژگی های زیر میباشد: وزن مولکولی آنزیم بر اساس حرکت آن در ژل پلی آکریل آمید حدود 53 کیلو دالتون میباشد، این آنزیم در ph بین 3.5 تا 7 پایدار میباشد بطوریکه بهینه ترین ph برای آن برابر 4.5 میباشد بنابراین این آمیلاز نوعی آنزیم اسیدوفیل نیز می تواند باشد . مطالعات اثر دما بر روی پایداری و فعالیت آنزیم نشان دهنده این بود که بهینه ترین دما برای فعالیت آنزیم 70 درجه سانتیگراد می باشد و آنزیم تا دمای 75 درجه سانتیگراد به مدت 45 دقیقه تا 75% پایدار می باشد. اثر یون های فلزی بر روی میزان فعالیت آنزیم با یون های zn2+، ca2+، ba2+، hg2+، mg2+، k+، na+ و چلاتور edta انجام پذیرفت و نتایج حاصله (میزان فعالیت آنزیم) برای این یون ها نشان دهنده عدم وابستگی نسبی فعالیت آنزیم به یون های فلزی بخصوص ca2+ است. داده های طیف cd مربوط به آنزیم بعد از انکوبه شدن آن در دمای 75 درجه به مدت 45 دقیقه هیچگونه تغییر قابل توجهی را در ساختار دوم آن نشان نمی دهد. پروفایل محصولات تولیدی توسط این آنزیم بوسیله کروماتوگرافی لایه نازک (tlc) در زمان های مختلف بررسی شد و نشان دهنده محصول نهایی گلوکز و مالتوز میباشد. در بررسی 20 آمینو اسید ابتدایی n-ترمینال آنزیم مشخص شد که این آنزیم شباهتی کمتر از 50% با سایر آنزیم های آمیلاز دارد که نشان دهنده ی جدید بودن آن است. با توجه به این سری ویژگی ها، قابل کاربرد بودن این آنزیم در صنعت مواد غذایی و احتمالاً شوینده ها کاملاً امکان پذیر می باشد.