نام پژوهشگر: سعید سپهری سرشت

جستجو ژن رمز گذار اینترونی آنزیمreverse transcriptase مقاوم به گرما (موسوم به (trt gene از سویه بومیbacillus و همسانه سازی آن در e.coli
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه الزهراء - دانشکده علوم پایه 1390
  فهیمه عرفانی تبار   شیرین قربانی

باکتری ها کارخانه های بی همتای بیولوژیک در تولید محصولات زیست فناوری هستند ویژگی-هایی نظیر تحمل شرایط خاص رشد و تولید آنزیم های مختلف، باکتریها را برای بهره برداری مورد توجه قرار داده است. عده ای از باکتری ها واجد عوامل ژنتیکی با قابلیت جابه جایی هستند. نظیر اینترون های گروه ii که سه آنزیم با ارزش وارونوشتاز , ( reverse transcriptase) اندونوکلئاز ,(endonuclease) مچوراز (maturase) رارمز می کنند. ژن trt، آنزیم وارونوشتاز مقاوم به حرارت در سویه geobacillus stearothermophilus strain 10 را رمز می کند محصول آن با قدرت تحمل دما تا 75 درجه سانتیگراد کاربرد زیادی در rt pcr و ساخت کتابخانه های ژنومی cdna دارد. هدف از مطالعه شناسایی سویه های geobacillus بومی دارای ژن rt می باشد. در این جهت ابتدا پرایمرهای طراحی شده در این بررسی برای شناسایی ژن استفاده شد. غربال گری اولیه از مجموعه ی باکتری های بومی برای شناسایی ژن trt نتیجه ای در بر نداشت بنابراین در این مرحله سویه ی geobacillus stearothermophilus ptcc 1713 برای شناسایی ژن مورد نظر و سویه geobacillus stearothermophilus strain 10 به عنوان کنترل مثبت با pcr مورد بررسی قرارگرفت که نتیجه ی آن تولید دو قطعه dna با اندازه-هایی مشابه قطعه ی مورد نظر و شباهت نتایج برای هر دو باکتری بومی و استاندارد بود. همسانه سازی هر دوقطعه در حامل های ptz 57 r و pet 28 a انجام شد و بعد تعیین توالی جهت تعیین هویت قطعات همسانه سازی شده انجام شد. اطلاعات حاصل از تعیین توالی همسانه ها نشان داد با وجود اینکه شباهت توالی نوکلئوتیدی با ژن trt زیاد نبود اما در یکی از قطعات بخشی از توالی همسانه سازی شده با یک وارونوشتاز از گیاه zingiber بیش از 97% شباهت وجود داشت پیامد های این یافته می تواند در راستای پیگیری تنوع بالا در ژن های رمز گذار rt و بیان گرفتن از ژن رمز گذار و همچنین بررسی فعالیت آنزیمی آن قابل توجه باشد. کلمات کلیدی: geobacillus stearothermophilus ، ژن اینترونی رمزگذار آنزیم وارونوشتاز trt، همسانه سازی