نام پژوهشگر: مسعود توحید فر

تعیین موقعیت تاکسونومیکی عامل لکه برگی باکتریایی پامچال در استان مازندران
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری - دانشکده کشاورزی 1390
  معصومه آقاسی نژاد   مسعود توحید فر

در بهار سال 1390 از برگ های پامچال وحشی(primula vulgaris) دارای علائم لکه برگی از چند منطقه جنگلی استان مازندران نمونه برداری شد. ازکشت نمونه های پامچال دارای علائم لکه برگی ،جدایه هایی با کلنی های محدب زرد رنگ ولعابدار روی محیط آگار غذایی حاوی سوکروز(nas) به دست آمد. واکنش فوق حساسیت پس از تزریق سوسپانسیون باکتری به برگهای شمعدانی ((pelargonium x hortorum بعد از 48 ساعت و بیماری زایی روی برگهای پامچال پس از 7 تا 14 روز به اثبات رسید. همه جدایه ها گرم و اکسیداز منفی ، هوازی اجباری، اوره آز منفی، کاتالاز مثبت و قادر به تولید h2s از سیستئین بودند. نقوش الکتروفورزی پروتئینهای سلولی جدایه ها تفاوت کمی با هم داشت. به منظور ارزیابی تنوع ژنتیکی جدایه ها، dna‎ ژنومی آنها استخراج و با بکارگیری آغازگرهای gyrb، reca و rpod قطعاتی از این سه ژن در واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) تکثیر و محصول به دست آمده با آنزیم های محدودگر هضم گردید. محصول های هضم آنزیمی با الکتروفورز در ژل پلی اکریل آمید و رنگ آمیزی با نیترات نقره مقایسه شد. از ضریب تشابه جاکارد برای تعیین تشابه جدایه ها و از روش upgamaو نرم افزار ntsys برای آنالیز خوشه ای استفاده شد. به منظور تعیین ارتباط فیلوژنتیکی و کمک به تشخیص دقیق گونه، قطعه هایی از ژن های gyrb ، reca ، rpod ، dnak و fyua با pcr تکثیر و تعیین توالی گردیدند. توالی نوکلئوتیدی به دست آمده، پس از همردیف سازی چندگانه (multiple sequence alignment) با برنامه mega4 با سایر توالی های مربوط به این ناحیه در گونه های مختلف xanthomonas موجود در genbank (ncbi) مقایسه شدند. جدایه ها در سطح تشابه 99-98% به گونه xanthomonas hortorum به ویژه پاتوار x.hortorum pv.hederae شباهت داشته و احتمالا جدایه های عامل لکه برگی پامچال به پاتوار گزارش نشده ای از این گونه تعلق دارند.

ساخت سازه کلروپلاستی حاوی ژن دخیل در تحمل به تنش های غیر زنده (fld) و انتقال آن به برنج
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زابل - دانشکده کشاورزی 1392
  ابراهیم قریشی   مسعود توحید فر

تنش های غیر زیستی از جمله خشکی و شوری اولین عامل کاهش محصول در دنیا است. در این تحقیق ژن بتائین آلدهید دهیدروژناز(badh) هم به عنوان یک نشانگر غیر آنتی بیوتیکی و هم به عنوان یکی از ژن های کاندید در تحمل به تنش های غیر زیستی به همراه ژن فلاودکسین(fld) در ساخت وکتور کلروپلاستی برای گیاه برنج مورد استفاده قرار گرفت. سپس طراحی کاست ژنی برای ژن های fld وbadh تحت نواحی تنظیمی کلروپلاستی انجام شد، به طوری که ژن fld همراه با rbcl 5utr و ژن badh همراه با t7gene10 5utr به صورت پلی سیسترونی تحت پیشبر قوی کلروپلاستی prrn و پایانبر rbcl 3utr کلون سازی شدند. سرانجام کاست کامل دو ژنی fld/badh به همراه نواحی تنظیمی از وکتور نوترکیب حاصل موسوم به pbf جدا و در مرکز ناحیه هدف گیری کننده به کلروپلاست برنج در دو جهت کلون سازی گردید. در این تحقیق به منظور تولید گیاه برنج تراریخته متحمل به تنش های غیر زنده به روش اگروباکتریوم از سویه eha105 وحامل پلاسمیدی p6-ubi استفاده شد. این وکتور حاوی ژن نشانگر باکتریایی استروپتومایسین و نشانگر گیاهی هیگرومایسین و ژن فلاودکسین (fld) می باشد. بدین منظور از کالوس های جنین زای برنج رقم هاشمی به عنوان بافت هدف استفاده شد. پس از آلوده کردن کالوس ها با سوسپانسیون باکتری، کالوس ها به محیط هم کشتی انتقال داده شد. گیاهان باززا شده محلول یوشیدا منتقل شدند. آنالیزpcr باپرایمر های virg، عدم آلودگی به اگروباکتریوم، و با پرایمر های fld نشان داد، حداقل یک نسخه از ژن fld در ژنوم این گیاهان وجود دارد. در روش دوم به منظور دستیابی به برنج تراریخته فاقد ژن نشانگر آنتی بیوتیکی، از پلاسمید های کلروپلاستی (pfrfb(- و pfrfb(+) ساخته شده استفاده شد. این پلاسمید ها به روش ریزپرتابه منتقل شدند. پس از بمباران کالوس‎ها به محیط کشت باززایی ms انتقال یافتند.آنالیزpcr باپرایمر های fld نشان داد، حداقل یک نسخه از ژن در ژنوم این گیاهان وجود دارد.