نام پژوهشگر: طاهر هرکی نژاد

ارتباط پلی مورفیسم ژن fabp4 با چربی لاشه در گوسفندان آمیخته افشاری×برولامرینو
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان - دانشکده کشاورزی زنجان 1390
  لیلا زاهدی   طاهر هرکی نژاد

پروتئین متصل شونده به اسیدچرب (fabp) یک خانواده چند ژنی هستند که با برداشت، اکسیداسیون اسیدهای چرب و هموستازی متابولیک عمومی مرتبط می باشند. هدف از مطالعه حاضر شناخت چندشکلی ناحیه پروموتر و اگزون اول ژن fabp4 و ارتباط آن با صفات چربی و لاشه گوسفند بود. در این مطالعه 97 رأس بره نر آمیخته افشاری×برولا مرینو (نسل r1) با سن تقریباً یکسان از گله تحقیقاتی-آموزشی دانشگاه زنجان مورد استفاده قرار گرفتند. اندازه گیری های سونوگرافی برای ضخامت چربی، ضخامت و سطح مقطع عضله راسته بر روی دام زنده در ناحیه پشت بین دنده 12 و 13 انجام گردید. همچنین، وزن قطعات مختلف لاشه پس از کشتار اندازه گیری شد. از تمام دام-ها نمونه خون جهت استخراج dnaو اندازه گیری فراسنجه های خون مانند کلسترول، hdl،ldl ،vldl و تری گلیسرید گرفته شد. پرایمرهای لازم برای اگزون شماره یک که قطعه ای به طول bp348 را تکثیر می نمود، از روی توالی های موجود از گونه های نزدیک به گوسفند طراحی گردید. جهت بررسی چندشکلی در ناحیه یاد شده ابتدا توسط pcr ناحیه مورد نظر تکثیر و سپس محصولات به دست آمده با استفاده از تکنیک sscpو بارگذاری بر روی ژل اکریل آمید 10 درصد مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج حاصل از sscpو تعیین توالی حاکی از وجود چندشکلی تک -نوکلئوتیدی در این ناحیه بود. بررسی ارتباط چندشکلی مشاهده شده با وزن قطعات مختلف لاشه و نیز ضخامت چربی، ضخامت و سطح مقطع عضله نشان داد که این چندشکلی ها هیچ ارتباط معنی-داری با آن ها نداشت، اما با بررسی ارتباط چندشکلی با فراسنجه های خونی اندازه گیری شده مشاهده شد با میزان ldl خون مرتبط می باشد.

تأثیر آفلاتوکسین b1 بر رشد سلول های اپیتلیال پستان گاو، و بیان ژن stat5 در شرایط کشت آزمایشگاهی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان - دانشکده کشاورزی زنجان 1391
  علی فروهرمهر   بابک قاسمی پناهی

چکیده امروزه در موارد زیادی دیده شده است که آفلاتوکسین ها به شیر منتقل شده اند. این مواد توسط قارچ های چون aspergilus. flvaus وa. parasiticus تولید می شوند، و از طریق خوراک آلوده وارد دستگاه گوارش و سپس پستان می شوند. با توجه به سمیت این مواد به نظر می رسد که بر رشد سلول های اپیتلیال پستانی تاثیر داشته باشند. یکی از مهمترین ژن های تاثیر گذار بر رشد سلول های اپیتلیال پستان stat5a می باشد که در پاسخ به پرولاکتین بیان می شود، حضور آفلاتوکسینb1 در پستان گاو می تواند بیان این ژن را نیز تحت تاثیر قرار دهد. برای بررسی این موضوع سلول های اپیتلیال بافت پستان گاو در حالت کشت تک لایه و سه بعدی مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور بافت پستان گاو پس از کشتار در اندازه cm2×2 جداه شد و پس از ضد عفونی و شتشوی لازم در کشتارگاه در کنار یخ به آزمایشگاه انتقال داده شد، پس از هضم آنزیمی با کلاژناز، به منظور رسیدن به تعداد سلول مناسب، کشت تک لایه صورت گرفت. رشد سلول ها نشان داد که این سلول ها در حالت کشت سلولی اولیه(primary culture ) رشد خوبی دارند. بعد از رسیدن به تعداد سلول مناسب، سلول ها به 16 چاهک از یک پلیت 24 خانه که به منظور کشت سه بعدی با ماتریژل پوشیده شده بود پاساژ داده شد. با گذشت 21 روز از کشت سه بعدی و رسید به تعداد سلول لازم، سه غلظت 15، 25 و 35 میکرولیتر از آفلاتوکسینb1 (هر کدام با چهار تکرار) به کشت اضافه. بعد از جداسازی سلول های از ماتریژل استخراج rna با استفاده از کیت صورت گرفت و به منظور تعیین کمیت وکیفیت rna نانودراپ انجام شد. همچنین بعد از سنتز cdna توسط کیت به منظور بررسی بیان ژن stat5a و gpdh، real time-pcr صورت گرفت. با گذشت 24 ساعت از اضافه کردن سم بر سلول ها، مشاهده شد در مقایسه با گروه کنترل با افزایش غلظت سم میزان نکروز سلولی بیشتر شد به طوری که کمترین میزان نکروز در تیمار با غلظت 15 میکرولیتر و بیشترین میزان آن در تیمار با غلظت 35 میکرولیتر بود. همچنین مشاهده شد در مقایسه با گروه کنترل با افزایش غلظت سم میزان بیان ژن stat5a نیز کاهش یافت. با توجه به نتایج به دست آمده به نظر می رسد که حضور آفلاتوکسینb1 علاوه بر مضراتی که ممکن است از طریق شیر برای مصرف کننده داشته باشد می تواند به بافت پستان دام نیز آسیب برساند. واژگان کلیدی: ماتریژل ، آفلاتوکسینb1 ، کشت سه بعدی، کشت تک لایه.

مایکوفلور ریشه گندم در استان زنجان با تاکید بر قارچ های هیفومیست
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان - دانشکده کشاورزی زنجان 1391
  لیلا عبدی پوراصل   رقیه همتی

به منظور شناسایی فلور قارچی ریشه و طوقه گندم در استان زنجان، در طی سال زارعی 90-1389 از 58 مزرعه گندم کشت دیم و آبی استان زنجان نمونه برداری به عمل آمد که ارقام سرداری، آذر2، امید و الوند از جمله ارقام رایج کشت شده در این مزارع بودند. جهت جداسازی قارچ های آلوده کننده غیر سطحی (داخلی) قطعاتی از ریشه و طوقه ضدعفونی شده بوسیله هیپوکلریت سدیم 1-5/0 درصد روی محیط کشت های آگار دار قرار داده شدند و برای جداسازی قارچ های آلوده کننده سطحی از روش کشت مستقیم قطعات ریشه و طوقه بدون ضدعفونی سطحی روی محیط های کشت آگار دار حاوی آنتی بیوتیک استفاده شد. خالص سازی جدایه ها با استفاده از دو روش نوک ریسه و تک اسپور انجام گردید. جهت جداسازی، خالص سازی و تحریک اسپور دهی و شناسایی قارچ ها از محیط کشت های مناسب مختلفی استفاده شد. در مجموع 286 جدایه قارچ بدست آمد که از این میان، 228 جدایه متعلق به رده هیفومیست ها مورد بررسی و شناسایی قرار گرفتند. پس از مطالعه ویژگی های پرگنه، ویژگی های میکروسکوپی و استفاده از داده های مولکولی (در مورد جدایه هایی که شناسایی آن ها با بررسی ویژگی های مورفولوژیکی میسر نگردید)، این جدایه ها در 11 جنس و 26 گونه به شرح زیر قرار گرفتند: alternaria alternata, alternaria tenuissima, alternaria cf. .mouchaccae, aspergillus auricomus, aspergillus niger, bipolaris australiensis, bipolaris sorokiniana, botrytis sp., curvularia inaequalis, embellisia chlamydospora, embellisia cf. chlamydospora, fusarium acuminatum, fusarium avenaceum, fusarium chlamydosporum, fusarium equiseti, fusarium redolens, fusarium sambucium, fusarium scirpi, fusarium solani, fusarium sp., microdochium nivale=(fusarium nivale), periconia circinata, penicillium chrysogenum, trichoderma parceramosum, ulocladium atrumدر این میان گونه های aspergillus auricomus و botrytis sp. به ترتیب برای نخستین بار از ریزوسفر و طوقه گندم در ایران گزارش می شوند. در این بررسی بیش ترین فراوانی متعلق به گونه های مختلف جنس های fusarium,، embellisia، alternaria، bipolaris و ulocladium بود.

بررسی وضعیت متیلاسیون ژنهای bmp15 و dgat1 در گوسفند افشاری و افشاری × برولامرینو
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان - دانشکده کشاورزی زنجان 1393
  لیلا دانش مقدم   طاهر هرکی نژاد

چکیده افزایش تعداد بره به ازای هر میش به عنوان راهکاری برای افزایش بهره وری در پرورش گوسفند مورد توجه زیادی قرار گرفته است. گرچه صفات تولیدمثلی از وراثت پذیری پائینی برخوردار هستند اما جهش هایی در ژن های gdf9، bmp 15 و گیرنده bmpr-1b یافت شده است که با چند قلوزایی در ارتباط است. هدف مطالعه حاضر بررسی بیان ژن bmp 15 در تخمدان میش های آبستن و غیرآبستن افشاری، اثر تنظیمی اپی ژنتیک بر روی پروموتور این ژن و نیز ژن dgat1 که دارای پروموتور با میزان gc بالا است،. در این مطالعه از تعداد 30 راس میش کشتار شده در کشتارگاه زنجان شامل 22 راس دام غیرآبستن و 8 راس دام آبستن نمونه بافت تخمدان تهیه و تا زمان استفاده در منهای 80 درجه سانتی گراد نگهداری شدند. dna نمونه ها با استفاده از روش فنل-کلروفورم از نمونه بافت استخراج گردید. توسط کیت cina pureو براساس دستورالعمل مربوطه از نمونه ها rna کامل استخراج گردید و سپس توسط کیت2-steps rt-pcr به cdna تبدیل شد. برای بررسی متیلاسیون dna، پرایمرها هم برای حالت متیله و هم تیمار شده با بی سولفیت طراحی گردید. pcr حساس به متیل بر روی نمونه ها انجام شد. پرایمرهای اختصاصی برای بررسی بیان ژن bmp 15 به عنوان ژن اصلی مورد مطالعه و نیز ژن gapdh به عنوان ژن کنترل داخلی طراحی گردید. نتایج بررسی نشان داد که پروموتر ژن bmp 15 در هیچکدام از نمونه ها متیله نمی باشد زیرا پس از تیمار نمونه ها با بی سولفیت سدیم نمونه ها با پرایمرهای معمولی (غیرمتیله) تکثیر نشدند اما پرایمر های غیرمتیله باعث تکثیر قطعه مورد نظر شدند. بنابراین در هیچکدام از نمونه ها پروموتر این ژن متیله نبوده است. این موضوع با نتایج حاصل از تعیین توالی نیز مورد تائید واقع شد. این نشان می دهد که ژن bmp 15 حتی در کروموزوم غیر فعال نیز فعال می باشد. نتایج بررسی اختلاف معنی داری از لحاظ بیان ژن bmp 15 بین دو گروه نشان نداد. احتمالا این ژن در ارتباط با سایر ژن ها و از جمله گیرنده های مربوطه اش در ارتباط با تولید مثل ایفای نقش می کند و به همین دلیل ممکن است بیان آن در مراحل مختلف تولیدمثلی مورد نیاز باشد.