نام پژوهشگر: ندا میرآخورلی

بررسی تنوع ژنتیکی لاله ی واژگون (l. f. imperialis) با استفاده از مارکر مولکولی rapd
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده کشاورزی 1389
  معصومه کوهگرد   ندا میرآخورلی

جنس فریتیلاریا در حدود 100 گونه دارد که بیشتر در نواحی گرم نیمکره ی شمالی شامل آمریکای شمالی، اروپا و همین طور نواحی مدیترانه ای در آسیای مرکزی تا چین و ژاپن دیده می شود. لاله ی واژگون گیاهی است که از نظر دارویی دارای اهمیت فراوان است، و به طور وسیع در صنعت داروسازی مورد استفاده قرار می گیرد. بررسی تنوع ژنتیکی درون گونه ها اطلاعات ضروری در مورد تاریخچه ی تکاملی آن ها و همچنین اطلاعاتی در مورد عوامل موثر در مورد حفاظت و نحوه ی مدیریت گونه ها به ما می دهد. در این مطالعه تکنیک rapd به عنوان ابزاری برای بررسی میزان تنوع ژنتیکی در جمعیت های گونه f. imperialis مورد استفاده قرار گرفت. برای این منظور ابتدا 160نمونه، از هشت جمعیتf. imperialis از مناطق مختلف زاگرس جمع آوری شد. شش پرایمر از 35 پرایمر تست شده بر اساس میزان پلی مورفیسم بودن آن ها انتخاب گردیدند. نتایج نشان داد که از 81 باند تولید شده 71 باند به صورت پلی مورف بودند. بر اساس تجزیه ی خوشه ای با استفاده از ضریب تشابه جاکارد و با استفاده از روش upgma 160 نمونه ی مورد بررسی در فاصله 45/0به سه گروه عمده تقسیم شدند. نتایج حاصل از تجزیه ی خوشه ای نشان داد که تنوع معنی داری بین جمعیت ها وجود دارد. تجزیه واریانس مولکولی نشان داد که میزان تنوع ژنتیکی بین جمعیت ها، درون جمعیت ها و بین گروه ها به ترتیب برابر با 32/43، 1/55، و 57/1 می باشد. برای این تجزیه و تحلیل، گروه بندی بر اساس پراکندگی جغرافیایی صورت گرفته بود. میزان تنوع ژنی کل (ht) برابر با 27/0 و میزان تنوع ژنی درون جمعیت ها (hw) برابر با 18/0 و همچنین میزان تنوع ژنی بین جمعیت ها برابر با 08/0 برآورد شد. تجزیه و تحلیل های مربوط به تنوع ژنی با استفاده از نرم افزارaflpsurv ver1/0. انجام شد. میانگین تعداد آلل های موثر برابر با 88/1 شد. شاخص شانون، و میانگین پلی مورفیسم نیز به ترتیب برابر با 65/0 و 6/87 گردید. میزان pic بین 82/0 تا 88/0 برآورد شد، و میانگین آن برابر با 85/0 شد. بر اساس ماتریس فاصله، بالاترین فاصله ی ژنتیکی برابر با 41/0 و بین جمعیت های آستانه و استهبان به دست آمد. همچنین کمترین فاصله ژنتیکی بین جمعیت های استهبان و اشتران کوه برآورد شد، و مقدار آن برابر با 18/0 می باشد.

تعیین نقش ژن دفنزین بیان شده در سیستم گیاهی جهت جذب روی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده کشاورزی 1392
  سمیراء فروزنده هفشجانی   بهناز صفار

فلزاتسنگین یکی از آلاینده های پایدار و غیرقابل تجزیه بیولوژیکی هستند که می توانند همراه پساب تصفیهشده یا فاضلاب صنایع مختلف به محیطزیست وارد شوند. از جمله راه های معمول تصفیه و حذف فلزاتسنگین از پساب، روش رسوبدهی شیمیایی است که این روش به دلیل داشتن هزینه بالا و تولید لجنشیمیایی مسئلهساز می باشد. از این رو روش حذفبیولوژیکی بهعنوان گزینه ای اقتصادی سازگار با محیط زیست، مورد توجه قرار گرفته است. موجودات عالی مانند گیاهان و حیوانات عموماً بوسیله تولید پیتیدهای غنی از سیستئین مانند متالوتیونین ها، فیتوکلاتین ها و دفنزین ها و اتصال آن ها به یون های فلزی به حضور فلزاتسنگین پاسخ می دهند. این پیتیدهای کوچک متصلشونده به فلزات دارای توالی غنی از سیستئین می باشند که به عنوان جاذب مواد عمل می کنند. از جمله این پپتید ها دفنزین های گیاهی هستند که خانواده بزرگی از پیتیدهای کاتیونی با توده های مولکولی کوچک و کروی با وزنی بین kd7- 5 با 54- 45 آمینو اسید هستند و دارای الگویی از هشت سیستئین می باشند. در این تحقیق از لحاظ نظری و تجربی نقش پروتئین نوترکیب دفنزین تولید شده با روش اگرواینفیلتریشن در سیستم یوکاریوتی گیاهی در جذب فلزسنگین روی هم چنین شرایط بهینه ی جذب فلز روی توسط این پروتیین بررسی شد. که طی بررسی شبیه سازی دینامیک مولکولی پروتئین نوترکیب در حالت غیر احیاء و حتی احیاء شده در 7 ph= قادر به جذب فلز روی نمی باشد، که این امر در مطالعات عملی نیز مورد تأیید قرار گرفت، اما قادر به جذب فلز کامیوم در هر دو حالت می باشد. در مطالعه عملی جهت بررسی نقش پروتئین نوترکیب دفنزین تولید شده، پلاسمید حامل ژن هیبرید از طریق تکنیک اگرواینفیلتریشن، تحت کنترل عناصر رونویسی متفاوت و در تیمارهای برگ سالم و برگ خراش داده شده و برگ اولیه (مسن) و برگ ثانویه (جوان) به داخل برگ های گیاه لوبیا انتقال داده شد. بعد از چهار روز پروتئین تولید شده در برگ استخراج و اندازه گیری گردید و نتایج به کمک نرم افزار spss و sas تجزیه و تحلیل گردیدند. بهترین بیان در برگ خراش دیده جوان برای پلاسمید 2 به علت مناسب بودن بافت برای اگرواینفیلتریشن و تحریک تولید فنول های محرک ژن های افزایش دهنده بیان در اثر زخم مشاهده شد. پروتئین های حاصل جهت بررسی تأثیر عوامل مختلف مانند ph، غلظت پروتئین، زمان و دمای جذب بر میزان جذب فلز روی توسط پروتئین مورد مطالعه تجربی قرار گرفتند. آنالیز داده های به دست آمده با نرم افزار sas تجزیه و مقایسه میانگین ها با آزمون lsd در سطح 1% معنی دار بودن تیمار ها را نشان داد. بدین ترتیب بهترین میزان جذب روی به همراه پروتئینی با غلظت 35 میکروگرم اتفاق میافتد که در محیطی با 6 ph= ، و دمای 35 درجه سانتیگراد به مدت 150 دقیقه انکوبه شود. در این تحقیق پروتئین نوترکیب دفنزین در حات طبیعی به عنوان یک جاذب فلز روی شناخته نشد، ولی می تواند تحمل گیاه را نسبت به فلز روی بالا می برد، از این رو تولید گیاه متحمل روی جهت کشت در مناطق آلوده می باشد.

بررسی اثرات ضدقارچی پروتئین حاصل از ژن sd2mod-licbm2 تولید شده در گیاه لوبیا
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده کشاورزی 1392
  فاطمه شفیع زاده   بهروز شیران

یکی از مشکلات بزرگ تولید محصولات کشاورزی بیماری?های گیاهی می?باشند که از گذشته دور همواره بر کمیت و کیفیت تغذیه انسان?ها اثر گذار بوده و باعث خسارت اقتصادی، زیست محیطی و سیاسی اجتماعی فراوانی شده اند.?????? بیماری های گیاهی ناشی از قارچ ها از عمده عوامل کاهش کیفیت و ایمنی محصولات کشاورزی هستند، که کنترل موثر و با دوام این نوع پاتوژن محصولات کشاورزی، تبدیل به یکی از چالش های عمده در کشاورزی مدرن شده است. دفنزین ها ی گیاهی پروتئین ها ی غنی از سیستئین هستند که یک نقش مهم دفاعی در مقابل پاتوژن ها ی گیاهی بازی می کنند. و به دلیل فعالیت ضد قارچی گسترده خود گزینه جذاب و امیدوار کننده هستند تا در بیوتکنولوژی کشاورزی مورد استفاده قرار گیرد. ???ساختار آمینواسیدی و فعالیت ها ی زیستی دفنزین ها از تنوع زیادی برخوردار می باشند و تفاوت ها ی کوچک در توالی آمینواسیدی، ساختار و تاثیر آن ها را در برابر پاتوژن ها دگرگون می سازد. ژنsd2mod یک ژن نوترکیب است، که بر اساس ژن دفنزین آفتابگردان sd2 ساخته شده است و در آن تغییراتی بر اساس توالی ژن دفنزین اسفناج (so-d2) اعمال شده است. در این مطالعه پلاسمید حامل ژن هیبرید از طریق تکنیک اگرواینفیلتریشن، تحت کنترل عناصر رونویسی متفاوت و در تیمارهای برگ سالم و برگ خراش داده شده و برگ اولیه(مسن) و برگ ثانویه (جوان) به داخل برگ های گیاه لوبیا انتقال داده شد و بعد از سه روز پروتئین تولید شده در برگ استخراج و اندازه گیری گردید. بهترین بیان در برگ خراش دیده جوان به علت مناسب بودن بافت برای اگرواینفیلتریشن و تحریک تولید فنول های محرک ژن های افزایش دهنده بیان در اثر زخم مشاهده شد. سپس اثر ضد میکروبی پروتئین سنتز شده از ژن sd2mod تحت سیستم یوکاریوتی بر روی عوامل بیماری زای گیاهی در محیط in vitro مورد بررسی قرار گرفت. اثر ضد میکروبی پروتئین سنتز شده از ژن sd2mod-licbm2 تحت سیستم یوکاریوتی بر روی قارچ های بیماریزای گیاهی fusarium oxysporum, fusarium solani, fusarium graminarum به خوبی مشاهده شد. پروتئین sdmod به خوبی اثر بازدارندگی را بر روی رشد هیف قارچ های گونه کلتوتریکوم شاملcolletotrichum acutatum و colletotrichum gloeosporioides نشان داد که حضور موثر پروتئین دفنزین را در ایجاد مقاومت قوی به این قارچ ها اثبات می کند. اثر ضد قارچی دفنزین sdmod با تغییر در مورفولوژی هیف قارچ fusarium graminarum که عبارت از تورم نوک هیف قارچ و اختلال هیفی و اسپور است همراه بود. در تطابق توالی اسیدآمینه ای دفنزین sd2mod با دفنزین های دیگر حضور اسید آمینه لیزین در ناحیه ی موثر ضد قارچی هسته موتیف ?، علت ایجاد تغییرات موفولوژی هیفی شناخته شد. این تحقیق از ژن دستکاری شده licbm2 به عنوان ژن مارکر استفاده شد همچنین اثرات ضد میکروبی برای این پروتئین بر روی برخی قارچ های مذکور مشاهد گردید.????????????????????????

تعیین شرایط بهینه بیان موقت از طریق اگرواینفیلتریشن در بادام
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده کشاورزی 1392
  افسانه حیدری ریحانی   بهروز شیران

از آن جا که انتقال دائم ژن و تولید گیاه تراریخته، خاصه در گیاهان چند ساله مانند بادام فرایندی زمانبر است و لازمه ی صرف وقت و هزینه ی زیاد می باشد، بیان موقت ژن با استفاده از اگروباکتریوم (اگرواینفیلتریشن) به عنوان یک راهکار مفید جهت مطالعه ی عملکرد ژن در سیستم های بیانی متفاوت و بهینه سازی فاکتورهای موثر در روش های تراریختگی مورد توجه قرار می گیرد. از این رو این مطالعه با هدف توسعه یک سیستم کارامد برای بیان موقت به واسطه ی اگروباکتریوم در بادام انجام شد. ژن گزارشگر لیکیناز که علاوه بر مزایای ایمنی زیستی، سادگی و حساسیت در کار، به دلیل توانایی شکستن پیوندهای بتاگلوکان، خاصیت ضد باکتریایی و ضد قارچی را داراست، برای ارزیابی عواملی که سطح بیان موقت را تحت تاثیر قرار می دهند، بکار برده شد. سه سیستم تظاهر مختلف حامل ژن لیکیناز، که تحت تاثیر عناصر تنظیمی متفاوت قرار داشتند به واسطه دو سویه اگروباکتریوم lba4404 و gv3501 با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن به برگ های رقم های مامایی و شاهرود 12 بادام انتقال داده شد. بیان این ژن در سطح پروتئین و rna مورد بررسی و تایید قرار گرفت. آنالیزهای آماری نشان داد که بیشترین میزان تولید پروتئین در برگ های رقم مامایی با استفاده از سیستم تظاهری که موجب تجمع پروتئین در شبکه آندوپلاسمی می شود، با کاربرد سویه lba4404 بدست می آید. همچنین در این پژوهش دو روش استفاده از سرنگ و سیستم خلأ در اگرواینفیلتریشن مورد مقایسه قرار گرفتند که کارایی پایین سیستم خلأ باعث شد در این تحقیق از روش سرنگ استفاده شود. همچنین مقایسه میزان پروتئین نو ترکیب تولید شده در گلبرگ و برگ های رقم مامایی نشان داد میزان بیان در گلبرگ بیشتر است. بررسی اثر ضد میکروبی آنزیم لیکیناز تولید شده بر دو عامل بیماریزا در بادام یعنی باکتری pseudomonas syringae و قارچ phytophtora cactorum نشان داد که لیکیناز باعث کاهش رشد پاتوژن ها می گردد.

بررسی تنوع ژنتیکی بین و درون جمعیت های لاله واژگون (f. imperialis) منطقه زاگرس با استفاده از مارکر مولکولی rapd
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده کشاورزی 1389
  معصومه کوهگرد   ندا میرآخورلی

جنس فریتیلاریا در حدود 100 گونه دارد که بیشتر در نواحی گرم نیمکره ی شمالی شامل آمریکای شمالی، اروپا و همین طور نواحی مدیترانه ای در آسیای مرکزی تا چین و ژاپن دیده می شود. لاله ی واژگون گیاهی است که از نظر دارویی دارای اهمیت فراوان است، و به طور وسیع در صنعت داروسازی مورد استفاده قرار می گیرد. بررسی تنوع ژنتیکی درون گونه ها اطلاعات ضروری در مورد تاریخچه ی تکاملی آن ها و همچنین اطلاعاتی در مورد عوامل موثر در مورد حفاظت و نحوه ی مدیریت گونه ها به ما می دهد. در این مطالعه تکنیک rapd به عنوان ابزاری برای بررسی میزان تنوع ژنتیکی در جمعیت های گونه f. imperialis مورد استفاده قرار گرفت. برای این منظور ابتدا 160نمونه، از هشت جمعیتf. imperialis از مناطق مختلف زاگرس جمع آوری شد. شش پرایمر از 35 پرایمر تست شده بر اساس میزان پلی مورفیسم بودن آن ها انتخاب گردیدند. نتایج نشان داد که از 81 باند تولید شده 71 باند به صورت پلی مورف بودند. بر اساس تجزیه ی خوشه ای با استفاده از ضریب تشابه جاکارد و با استفاده از روش upgma 160 نمونه ی مورد بررسی در فاصله 45/0به سه گروه عمده تقسیم شدند. نتایج حاصل از تجزیه ی خوشه ای نشان داد که تنوع معنی داری بین جمعیت ها وجود دارد. تجزیه واریانس مولکولی نشان داد که میزان تنوع ژنتیکی بین جمعیت ها، درون جمعیت ها و بین گروه ها به ترتیب برابر با 32/43، 1/55، و 57/1 می باشد. برای این تجزیه و تحلیل، گروه بندی بر اساس پراکندگی جغرافیایی صورت گرفته بود. میزان تنوع ژنی کل (ht) برابر با 27/0 و میزان تنوع ژنی درون جمعیت ها (hw) برابر با 18/0 و همچنین میزان تنوع ژنی بین جمعیت ها برابر با 08/0 برآورد شد. تجزیه و تحلیل های مربوط به تنوع ژنی با استفاده از نرم افزارaflpsurv ver1/0. انجام شد. میانگین تعداد آلل های موثر برابر با 88/1 شد. شاخص شانون، و میانگین پلی مورفیسم نیز به ترتیب برابر با 65/0 و 6/87 گردید. میزان pic بین 82/0 تا 88/0 برآورد شد، و میانگین آن برابر با 85/0 شد. بر اساس ماتریس فاصله، بالاترین فاصله ی ژنتیکی برابر با 41/0 و بین جمعیت های آستانه و استهبان به دست آمد. همچنین کمترین فاصله ژنتیکی بین جمعیت های استهبان و اشتران کوه برآورد شد، و مقدار آن برابر با 18/0 می باشد.

مقایسه ژنوتیپ های بزرک از نظر خصوصیات مورفولوژیکی، عملکردی و کیفیتی
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - پژوهشکده کشاورزی 1393
  نگار توکلی   محمود خدامباشی

بزرک (linum usitatisimmum l.) یکی از گیاهان دانه روغنی است که دانه آن دارای 40 -45 %روغن می باشد. تنوع ژنتیکی و تعیین روابط موجود بین صفات زراعی در بزرک می تواند در برنامه به نژادی و انتخاب ژنوتیپ هایی که دارای صفات زراعی و عملکرد مطلوب هستند مورد استفاده قرار گیرد. در این پژوهش صفات زراعی و روابط بین عملکرد دانه و اجزای آن در برخی لاین های اصلاحی بزرک موردارزیابی قرار گرفت. در این رابطه 11 ژنوتیپ بزرک در قالب طرح بلوک کامل تصادفی با 3 تکرار در سال 92- 1391 در مزرعه تحقیقاتی دانشکده کشاورزی دانشگاه شهرکرد کشت و مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج تجزیه واریانس نشان داد اثر ژنوتیپ برای صفات تعداد کپسول در بوته، انشعاب بوته، عملکرد دانه در بوته، عملکرد در واحد سطح، درصد روغن، عملکرد روغن در واحد سطح معنی دار بود. بیشترین میزان عملکرد در واحد سطح مربوط به رقم کردستان و کمترین مقدار عملکرد را رقم توده اهواز نشان داد. بین صفات تعداد کپسول و عملکرد دانه در بوته ، عملکرد در واحد سطح و عملکرد روغن همبستگی مثبت و معنی داری وجود داشت. بالاترین میزان همبستگی با مقدار 0/99، همبستگی بین عملکرد در واحد سطح با عملکرد روغن است. و پس از آن بالاترین میزان همبستگی با مقدار 0/86 مربوط به همبستگی بین عملکرد دانه در بوته با عملکرد روغن و عملکرد در واحد سطح مشاهده شد. به طور کلی نتایج این تحقیق نشان داد که تنوع ژنتیکی برای اکثر صفات زراعی جهت بهبود ژنتیکی آنها وجو دارد و اجزای عملکرد شامل تعداد دانه در کپسول و تعداد کپسول در بوته با توجه به اهمیت و تاثیر مستقیم آنها بر عملکرد دانه می تواند به عنوان شاخص های انتخاب جهت بهبود عملکرد دانه مورد استفاده قرار گیرند.

ساخت و طراحی سیستم تظاهر ژن دفنزین گندم (رقم فلات) در لوبیا
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده کشاورزی 1393
  اسداله آبیارفینی   ندا میرآخورلی

استفاده از روش های مهندسی ژنتیک و ژنتیک مولکولی برای افزایش کمی و کیفی محصولات از یک سو و کاهش هزینه ها و زمان تولید از سوی دیگر، در شاخه های گوناگون کشاورزی بسیار ارزشمند گردیده است. وارد کردن ژن های گوناگون مربوط به صفات مختلف به ده ها گونه جهت اصلاح یا بهبود فرآورده های کشاورزی و کنترل آفات زیستی، تنها نمونه های کوچکی از کاربردهای گسترده گیاهان تراریخته را شامل می شوند. از مشکلات تولید گیاهان تراریخته عدم تظاهر مناسب ژن در گیاه میزبان است که ناشی از عدم کفایت سیستم های تظاهر آن می باشد. از جمله استراتژی های بیانی ژن بیان موقت است. بیان موقت ژن با استفاده از اگروباکتریوم (اگرواینفیلتریشن) به عنوان یک راهکار مفید جهت مطالعه ی عملکرد ژن در سیستم های بیانی متفاوت مورد توجه قرار می گیرد. از جمله ژن های مورد توجه جهت تولید گیاهان تراریخته ژن های کدکننده پروتئین های دفاعی هستند که در سالهای اخیر به طور گسترده ای مورد مطالعه قرار گرفته است. از این رو این مطالعه با هدف کلون سازی و انتقال ژن دفنزین فلات به گیاه لوبیا انجام شد. پروتئین دفنزین به دلیل دارا بودن خاصیت ضد باکتریایی و ضد قارچی و نقش داشتن در سیستم دفاعی گیاه، بکار برده شد. سیستم تظاهر حامل ژن دفنزین، که تحت تاثیر عناصر تنظیمی متفاوت قرار داشتند به واسطه اگروباکتریوم سویه lba4404 با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن به برگ های گیاه لوبیا انتقال داده شد. بیان این ژن در سطح پروتئین و rna مورد بررسی و تایید قرار گرفت. بررسی اثر ضد میکروبی پروتئین شیمر تولید شده بر دو عامل بیماریزا یعنی باکتری staphylococcus aureus و قارچ fusarium solani نشان داد که دفنزین باعث کاهش رشد پاتوژن ها می-گردد. در نهایت الگوی بیان سه ژن از خانواده ی پروتئین های دفاعی (s-like rnase، دفنزین، پراکسیداز) با استفاده از داده های ریزآرایه بررسی و نقش آنها در استرس های زنده و غیرزنده تایید شد.

طراحی و ساخت سیستم تظاهر ژن پروتئین انتقال دهنده چربی (ltp2) در لوبیا
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده کشاورزی 1393
  پریا آرین پور   ندا میرآخورلی

پروتئین های انتقال دهنده ی لیپید با نام اختصاری ltp، پپتید های کوچک و غنی از سیستئین و کاتیونی می باشند. این پروتئین ها در حدود 10-7 کیلو دالتون وزن دارند و براساس وزن مولکولی به دو گروه ltp1 و ltp2 تقسیم می شوند که وزن مولکولی آن ها به ترتیب 9 و 7 کیلو دالتون می باشد. این پروتئین ها دارای فعالیت بیولوژیکی مختلف می باشند و همچنین تأثیر خاصی در مکانیسم دفاعی گیاهان دارند. در این مطالعه با بررسی کتابخانه های est، مشخص گردید که ژن هایltp در تنش با بیماری فوزاریومی و همچنین در طی تنش خشکی در گیاه گندم افزایش بیان نشان می دهند. با بررسی کتابخانه های میکرواری آلودگی فوزاریوم و زنگ در گندم و جو افزایش بیان ژن های ltp در رقم های مقاوم در مقایسه با رقم های حساس با افزایش زمان پس از آلودگی مشخص گردید. بنابراین می توان نتیجه گرفت که بیان بالای این ژن در افزایش تحمل این گیاهان در برابر تنش ها موثر است. همچنین در این مطالعه ژن ltp2 گندم فلات جهت بیان در سیستم گیاهی کلون گردید و بعد از انتقال موقت به گیاه، اثرات ضد میکروبی پروتئین نو ترکیب مورد مطالعه قرار گرفت. ltp2 گندم، رقم فلات دارای 121 اسیدآمینه است که ساختار سه بعدی آن از 4 هلیکس آلفا تشکیل شده و دومین پروتئینی آن از اسیدآمینه 30 آغاز و تا اسیدآمینه 117 ادامه می یابد. برای ساخت سیستم تظاهر ژن ltp2، ژن ltp2 موجود در پلاسمید pjet1.2 تکثیر و جداسازی گردید. سپس ژن ltp2 و پلاسمید pbisn1-in با آنزیم برشیhindiii برش خورده و لایگیشن انجام شد. سپس پلاسمید نوترکیب در باکتری e.coli سویه dh5? کلون گردید. برای بررسی کارایی سیستم بیانی ساخته شده ابتدا پلاسمید نوترکیب استخراج و به اگروباکتریوم سویه lba4404 منتقل و سپس با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن به گیاه لوبیا انتقال داده شد. بیان این سیستم در سطح rna بررسی گردید و همچنین با بررسی میزان پروتئین فعال و محلول در برگ تزریق شده با پلاسمید نوترکیب بیان و عملکرد پروتئین تأیید شد. بررسی اثر پروتئین شیمری حاصل بر باکتری staphylococcus aureus خاصیت ضد میکروبی این پروتئین را نشان داد.

طراحی، سنتز، همسانه سازی و ارزیابی بیان پروتئین دفنزین گندم (triticum aestivum) در میزبان اشریشیا کولای
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهرکرد - دانشکده علوم پایه 1393
  مریم مرتضوی وردنجانی   ندا میرآخورلی

دفنزین های گیاهی، خانواده ای از پپتیدهای ضد میکروبی کاتیونی کوچک ) 60 - 45 آمینو اسید( وغنی از سیستئین هستند که برای آنها طیف گسترده ای از فعالیت های ضد میکروبی از قبیل، تاثیرات بازدارندگی رشد بر طیف وسیعی از قارچها و باکتریهای گرم مثبت و گرم منفی نسبت داده شده است. ژن دفنزین گندم (k9m2t4) ، پروتئینی با 59 آمینو اسید کد می کند . هدف این مطالعه طراحی، سنتز، همسانه سازی و بیان پروتئین دفنزین گندم است. در این مطالعه ژن دفنزین جهت بیان بیشتر در سویه ی اریگامی origami) ( باکتری e. coli ، بهینه سازی شده و به ژن سومو متصل گردید. ژن سومو پروتئینی را با خاصیت چاپرونی کد می کند که تاخوردگی مناسب پروتئین دفنزین را تسهیل کرده و حلالیت آن را افزایش می دهد، سپس توالی ترکیبی )دفنزین _سومو( در وکتور pet-32a(+) همسانه سازی و نتیجه ی آن برای انتقال به سلولهای باکتریایی (e.coli origami) مورد استفاده قرار گرفت، باکتریها در محیط کشت luria-bertani تحت القای iptg یک میلی مولار در 30 درجه سانتی گراد رشد کردند و پروتئین ترکیبی در (e.coli origami) بیان شد. پروتئین ترکیبی با وزن مولکولی 38 کیلودالتون روی ژل sds-page آنالیز شد و توسط وسترن بلات و دات بلات تائید گردید. بیشترین بیان در 6 ساعت پس از القای iptg روی ژل sds-page مشاهده گردید ونتایج وسترن بلات و دات بلات نشان داد که پروتئین نوترکیب به طور اختصاصی به آنتی بادی mouse anti-(his) 6 peroxidase متصل گردیده است. همچنین هاله های عدم رشد در محیطکشت مولرهینتون آگار، خاصیت ضد باکتریایی پروتئین نوترکیب را نشان داد.