نام پژوهشگر: زهرا عظیمی

کلونینگ ژن متالوتیونین در باکتری پسودوموناس به منظور افزایش میزان جذب کادمیم و جیوه در باکتری مهندسی شده
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه علوم و فنون دریایی خرمشهر - دانشکده علوم دریایی و اقیانوسی 1390
  زهرا عظیمی   حسین ذوالقرنین

چکیده: در این مطالعه ابتدا جداسازی باکتری مقاوم به جیوه از پساب های منطقه صنعتی بندر امام خمینی (ره) صورت گرفت. پس از استخراج dna و pcr با استفاده از پرایمر های16s rrna ، ژنوم آن تکثیر شد و توالی16sریبوزومی این باکتری مشخص و باکتری مورد نظر شناسایی شد. باکتری محیطی مقاوم به دست آمده با 97 درصد مطابقت، متعلق به خانواده پسودوموناس بوده که نام علمی آن pseudomonas aeruginosa می باشد. ژن سنتتیک متالوتیونین سیانوباکتریsp. pcc 7942 synechococcusبا نام smta با استفاده از وکتور کلونینگpbluescript ks و همچنین وکتور بیان شوندهpet- 15b در باکتریe. coli k12 سویهdh5? و باکتری محیطی مقاوم به فلزات کادمیم و جیوه با استفاده از روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونینگ ژن پس از برش آنزیمی با آنزیم های برشگر اختصاصی و همچنین pcr ژن متالوتیونین و روش تعیین توالی، در باکتری e.coli و سپس باکتری محیطی مورد تایید نهایی قرار گرفت. به منظور بررسی تغییرات میزان مقاومت باکتری ها نسبت به فلزات سنگین باکتری های ترانسفورم شده به همراه کنترل بر روی محیط کشت با غلظت های مختلف فلزات کادمیم و جیوه (450-50 (ppm کشت داده شد. مقاومت باکتری محیطی از ppm300-150 در مورد کادمیم و ppm 420-300 در مورد جیوه افزایش یافت. همچنین نتایج نشان داده اند که مقاومت باکتری e. coli نسبت به هیچکدام از فلزات افزایشی را نشان نداده است. به منظور بررسی میزان تجمع زیستی، باکتری های ترانسفورم شده به همراه کنترل در محیط کشت با غلظت اولیه 80 میکروگرم برمیلی لیتر جیوه و کادمیم کشت داده شدند و پس از هضم با اسید نیتریک 69% میزان تجمع فلزات در آن ها با استفاده از دستگاه جذب اتمی و vapor cold (برای جیوه) اندازه گیری شد. اما نتایج بررسی آماری داده های حاصل از اندازه گیری میزان تجمع فلزات کادمیم و جیوه تفاوت معنی دار در میزان تجمع فلز کادمیم در باکتری ترانسفورم شده محیطی را نشان داد در حالی که تفاوت معنی داری در میزان تجمع فلز جیوه در باکتری های ترانسفورم شده محیطی در مقایسه با سویه های شاهد مشاهده نشد. در مورد باکتری e. coliباکتری ترانسفورم شده تفاوت معنی داری در میزان تجمع فلزات کادمیم و جیوه را نسبت به شاهد نشان ندادند.