مزایای چشمگیر آنزیم های تثبیت شده از قبیل پایداری بیشتر آنزیم ،امکان استفاده چند باره از یک منبع آنزیمی و جداسازی آسان آن از مخلوط واکنش، سبب جلب توجه محققان در جهت گسترش روشهای تثبیت و استفاده از آنزیم های تثبیت شده گشته است. آنزیم آلفا آمیلاز یکی از پر کاربردترین آنزیم های صنعتی است که در صنایع مختلف، از جمله صنایع غذایی، نساجی،کاغذ سازی و تخمیری کاربرد دارد و تا کنون بر روی سطوح مختلف و با روش های متفاوت تثبیت شده است که هر یک از آنها مزایا و معایبی را به همراه داشته است. در پژوهش حاضر، آنزیم آلفا آمیلاز برای اولین بار به صورت غیر ژنتیکی و به دو روش برگشت پذیر و برگشت ناپذیر بر روی سطح اسپور باسیلوس سوبتیلیس تثبیت شده است. در روش برگشت پذیر آنزیم آلفا-آمیلاز از طریق میانکنش های الکترواستاتیک و هیدروفوبیک به صورت جذب سطحی بر روی سطح اسپور تثبیت شد و در روش برگشت ناپذیر، آنزیم با استفاده از n هیدروکسی سوکسین آمید و اتیل دی متیل آمینو پروپیل به صورت کوالان به سطح اسپور تثبیت شد. سپس ویژگی های کاتالیتیک آنزیم آزاد با آنزیم های تثبیت شده مورد بررسی و مقایسه قرار گرفت. میزان آنزیم تثبیت شده به روش جذب سطحی 22/21 درصد و برای آنزیم تثبیت شده به روش کوالان 5/94 درصد مشاهده شد. ph بهینه فعالیت آنزیم آزاد برابر با 6 و ph بهینه فعالیت آنزیم تثبیت شده برابر با 8 بود. فعالیت آنزیم آزاد u/l 5/6073 و فعالیت آنزیم تثبیت شده به روش جذب سطحی و کوالان به ترتیب u/l 1728 و u/l 2134 به دست آمد. دمای بهینه فعالیت آنها بدون تغییر و در هر دو حالت 60 درجه سانتی گراد است اما آنزیم تثبیت شده به روش کوالان فعالیت بهتری نشان می دهد. آنزیم تثبیت شده به روش کوالان پس از 10 سیکل استفاده 68% فعالیت خود را حفظ می کند. واژه های کلیدی: آنزیم آلفا-آمیلاز، تثبیت اسپور، جذب سطحی، پیوند کوالان، nhs و edc