نام پژوهشگر: فاطمه رادمنش

تولید، تغلیظ و تعیین عیار ناقل ویروسی بر پایه murine leukemia virus
پایان نامه وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه اصفهان - دانشکده علوم پایه 1391
  فاطمه رادمنش   ماندانا بهبهانی

ابزارهای گوناگونی به منظور انتقال ژن به سلول های یوکاریوتی توسعه یافته اند، در میان آن ها، کارایی ویروس های rna دار متعلق به خانواده رتروویریده به دلیل الحاق پایدار ژنوم خود در کروموزوم های میزبان بالاتر است. ویروس لوکمی موش (mlv) شناخته شده ترین عضو جنس اورتورتروویرینا از گامارتروویروس ها است. ناقل ویروسی بر پایه mlv تنها قادر به بیان ژن های خارجی در سلول های در حال تقسیم میتوز می باشد، که بیانگر مناسب بودن این ناقل به عنوان ابزار انتقال ژن در ژن درمانی سرطان است. دراین مطالعه، ناقل ویروسی بر پایه mlv در رده سلولی hek293t با روش ترانسفکشن همزمان و گذرا سه پلاسمید شامل pbabe-gfp (پلاسمید بیان کننده ژن گزارشگر gfp)، pbs-cmv-gagpol (پلاسمید حاوی ژن های gagpol) وpmd2g (پلاسمید بیان کننده ژن vsvg) و استفاده از کلسیم فسفات تولید شد. سلول های ترانسفکت شده از طریق تکنیک فلوسیتومتری بررسی شدند و نرخ بیان gfp، 94/50 درصد حاصل گردید. ناقل ویروسی تولید شده با دو روش اولتراسانتریفیوژ و محلول پلی اتیلن گلیکول غلیظ شد. رقت های سریالی از ویروس غلیظ شده تهیه گردید و عیار ویروس بر حسب واحد عفونی بر میلی لیتر (106 × 21 ذره عفونی در هر میلی لیتر) محاسبه شد. سپس، ترانسداکسیون دو رده سلولی vero و a549 با استفاده از ناقل تولید شده صورت گرفت و نرخ بیان gfp حدود 49 درصد برای هر دو رده سلولی بدست آمد.